小中大【求助】为什么我的转染一直不成功
我用含有p53基因的pCDNA3质粒转染入人胚肺成纤维细胞，步骤如下：
1 第一天铺板：将细胞铺板于24孔板，使第2天细胞密度达到80％左右。培养液是含有10％胎牛血清的DMEM液。
2 第二天转染：（1）将质粒1ug与50ulDMEM原液混合，invitrogen公司的lipofectamine2000脂质体2ug与50ulDMEM原液混合，在5min内将二者混合，室温孵化20min。
（2）用DMEM原液洗细胞3次。
（3）将500ulDMEM原液加入质粒和脂质体的混合液中，混匀后加入细胞中。
3 第三天传代：将24孔板中1孔细胞传代于6孔板的1个孔中。相当于1：5传代。
4 第四天加G418：将16ul的50mg/ml的G418加入2ml含有10％胎牛血清的DMEM 中，混匀，加入细胞中。G418终浓度为400ug/ml.
5 观察细胞，第8天换新的G418筛选。
令人痛心的是我的细胞在第9天开始脱落死亡，12天左右基本就没有细胞了。我都做了接近2个月了，还是不成功，请高手多多指点。我用的是promega的转染级质粒提取试剂盒。
