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标题:【求助】细胞传代后,渐渐死去!

IAM007[使用道具]
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1
 

【求助】细胞传代后,渐渐死去!


我的细胞,刚刚复苏时一切正常,但传代后就发现有很多细胞死亡,平皿底部有一些小黑点似乎在移动,又象是细胞核,到第二次传代后,细胞基本就死光了,我已经复苏了4管细胞了,培养液÷血清都换过了,单细胞仍然没有存活的迹象,谁能帮我一下?不胜感激!
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hold住[使用道具]
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2
 

以我的经验有两种可能:
1.细胞被污染了。一般细胞刚复苏时状态应该还是好的,但不能代表以后的发展。我们实验室曾经出现过这种问题。复苏了好多次都失败了。有可能是细胞冻存时就被污染了。
2.细胞没有放在液氮中冻存。一般情况放在-70度冰箱中时可以短期冻存而不影响细胞状态的,但不要超过3个月。我的同学就时因为放了半年,细胞不行了。
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IAM007[使用道具]
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3
 
谢谢楼上的回答,但我觉得细胞冻存时就被污染的可能不太大,因为我取了不同批的冻存细胞,结果都是一样的;并且在冻存后的两周里,我对我的细胞进行过复苏,一切正常。就在上个月,我们还将第一批细胞送给其他人用,也没听说有问题。
我的细胞一直就在液氮中保存。我也觉得很可能是被污染了,但显微镜下又看不见异样,只有一些像细胞核一样的小黑点,似乎在移动,又不太象,因为毕竟我的细胞大部分都碎了,所以也很可能是细胞核。
另外我注意到,似乎细胞在死亡之前,经历了一个细胞涨大的过程。盼望得到大家的帮助!
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二丫头466[使用道具]
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你的情况和我的一样,我正在寻找原因。我估计可能性有:1,培养液有毒。2,PH有异常。3,细胞对添加剂较敏感。4,培养环境的影响。
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IAM007[使用道具]
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5
 
楼上说的有部分与我看法相同,培养液有毒或PH有异常似乎与我的不太相符,因为我的培养液颜色没什麽变化。养细胞时也未添加什麽,我也觉得象环境的影响,但案板上显示的可是没错!所以现在我觉得最有可能的还是被污染了,但是什麽却不得而知了!多交流,互相帮助!祝我们好运!!
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utt0989[使用道具]
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换一批培养液试试。就这么看,培养液有污染的可能性最大。
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生物迷[使用道具]
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我也有过这种情况,我养的QG-56细胞,只要传代就死一大批,而且肯定不是污染造成的,可能是培养基不对,建议你上ATCC 看看适合的培养基,还有严格控制消化时间也是个问题,接种密度不要太低
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dongdongqiang[使用道具]
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相关疾病:
肿瘤
呵呵,我培养的细胞是肿瘤细胞和一个 p53基因敲除的细胞,本来上个学期初学养细胞的时候都养得好好的,可这个学期我养的三种细胞都死光光过。我们这里是专门雇人洗这些细胞培养的用具的,这个学期换了个新手来,有时那些用具上都看得到铬酸干后留下的黄斑;而且这学期我们这里很多刚学细胞培养的各种习惯一点都不好,常搞得工作台乱糟糟的,用完的东西扔在桶里也不添水泡着。有时候换了液细胞就不行了,不过现在我都不再马上丢了,有时好好洗几次、换培基,几天下来又长得不错了;有时死的细胞留在壁上很多残渣,换培基还是长不好,就洗洗、加消化液消化一下(少加点)、在显微镜下看渣滓消化下来了、加培基(多加一些),过后活着的细胞又贴壁了,把渣滓洗掉、换培基,折腾一通以后那些细胞又长得很好了。
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IAM007[使用道具]
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我也决定彻底换一下培养基和血清,因本人养的也是瘤细胞,对这些东西一项要求就不是很严格,当然是长的好的时候,这次可真是把我搞的不知所措了!今天将细胞拿给一位老教师看,他也说平皿底部确实有一些比较均一的小黑点,但也感觉不太像污染,不知为何物?谢谢大家帮助!
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cocacola[使用道具]
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个人感觉。你的细胞污染的可能性很大,我们室里也碰到这种情况,开始谁也搞不清什么原因。现在逐渐明确了,刚复苏里细胞好好的,三天后就开始不行了。如果早期换液细胞也不会死这么快。我们细胞的情况是:培养基颜色不变的或快速变红。终于有一天,我发现(高倍镜)下一些乱跑的东西,明白了。细菌污染!现在正大扫除。
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