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标题:【求助】怎样证明一种药物可以抑制细胞增殖但不...

西子[使用道具]
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发表于 2012-10-30 12:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】怎样证明一种药物可以抑制细胞增殖但不...


已经对细胞做了MTT和cck－8测试，证明药物可以抑制细胞的增殖，但怎么证明药物不是杀伤细胞而是抑制它的增殖呢？细胞形态学观察，台盼兰染色，绘制细胞生长曲线，3H-TdR掺入应该可以吧？还有没有更客观的指标呢？
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2012-10-30 12:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

药物作用完毕后，乙醇固定， PI染色，流式细胞仪检测。如果用毒性可以杀伤细胞， 则有部分细胞为PI 阳性。注意设立对照。
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西子[使用道具]
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发表于 2012-10-30 12:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢！我先用台盼兰染色试试再用你的方法。
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园丁##[使用道具]
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发表于 2012-10-30 12:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

BrdU也可以!
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发表于 2012-10-30 12:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问楼上主任，可以检测药物抑制细胞生长吗？
我想用几种不同的方法说明某种药物对某种细胞生长有抑制作用。我培养的悬浮细胞。
除了MTT,CCK-8,克隆形成抑制试验，胎盘兰染色还有其它方法吗？
那种的敏感性更高？用AnnexinV－PI双染检测将凋亡与死亡的细胞相加可以吗？
有没有现成的文献。
多谢了。
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发表于 2012-10-30 12:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用PI染色检测死亡细胞是绝对不能用事先用乙醇固定的，乙醇固定会导致细胞膜通透，使所有细胞都能被PI染色．

回樱桃子：细胞生长时S期细胞合成DNA，会整合BrdU，因此检测细胞中BrdU量可以间接测定细胞生长．clone formation assay灵敏度要远高过MTT,CCk-8,如果想检测细胞生长，数细胞是最基本也是最可靠的方法呀．:p

为什么要把Ann/PI相加呢？要加的话，PI都不用放了
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ending[使用道具]
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发表于 2012-10-30 12:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还请教，我看文献中描述：做克隆形成时可以用24孔板。但不同文献中每孔细胞数的相差很大，有的每孔只有2－3个细胞，而有的文献达到1000个细胞。做药物抑制肿瘤细胞生长的实验到底每孔用多少个细胞比较敏感。谢谢
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西子[使用道具]
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发表于 2012-10-30 12:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最近用台盼兰染色做了几批细胞，但结果很差：
1.发现低浓度组药物3天后死亡率就达到40％
2.正常对照组死亡率也很高，达30~40%
看来跟操作有关，将96孔板换成24孔板，未改善。
排除是否消化过度，将消化法改成刮除细胞，未改善。
台盼兰浓度的原因？
我用的是0.4％台盼兰溶液，0.2g台盼兰加入50ml三蒸水，用时一滴细胞悬液一滴台盼兰，后来变为9滴细胞悬液一滴台盼兰，都不行。
看司徒镇强细胞培养，0.4％台盼兰是用PBS配的，我的台盼兰渗透压低的缘故？
如果药物有细胞毒性，那么我做的其他实验都没有意义了，毕业必须要改课题了，5555555555～～～～～
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发表于 2012-10-30 12:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

具体要多少细胞得根据细胞种类而定，克隆数多的可少些，相反要多些。因为是抑制试验，总希望正常对照的克隆多些比较准确吧，用1000个比较常见。
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xue258[使用道具]
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 小中大
正常对照组死亡率这么高肯定有问题。可能是台盼兰用了蒸馏水的原因，也可能细胞养得不好。你可以把台盼兰直接加到孔里观察，排除悬浮细胞时的操作影响。
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