【求助】刚复苏的细胞，两天就污染了

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标题:【求助】刚复苏的细胞，两天就污染了

8s5g[使用道具]
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发表于 2012-10-30 13:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

培养液浑浊，肉眼可见培养液表面有类似油渍的东西，但是低倍镜下并未观察到可疑的生物体！
由于最近细胞总是污染，孵箱、培养液、用具全部是重新消毒的，结果刚复苏的细胞，两天就出现了污染！
请各位大侠帮帮我吧，到底是什么污染，该怎么处理呀？

caihong[使用道具]
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发表于 2012-10-30 13:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

培养液混浊了最常见的是细菌污染，而且低倍镜下是看不见细菌的
你可以做一个革兰氏染色看看

utt0989[使用道具]
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发表于 2012-10-30 13:07 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这个与器械、培养基、超净台以及你的操作都有关，所以你要把所有的操作都正规起来。我们这儿有的实验室超净台都不吹风了，所以他们的细胞经常污染，没有办法。

guagua[使用道具]
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发表于 2012-10-30 13:07 资料个人空间短消息加为好友

小中大

观看剩余冻存的细胞液体是否有油渍类的漂浮物。检查所有用具和器械，再复苏时将培养液用无菌过滤器过滤后加入培养瓶。

小荷尖尖[使用道具]
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发表于 2012-10-30 13:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

是不是会是培养基污染？
你们是不是直接过滤灭菌，在有如楼上所言，各个方面的因素都要考虑，包括所使用的整套器材，还有你的细胞式自己冻存的还是买来的，建议对整个细胞间及超净台进行熏蒸消毒

8s5g[使用道具]
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发表于 2012-10-30 13:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

上一次的细胞全都不要了！包括先前冻存的细胞！
重新复苏，一个月内没有出现类似的情况。可是十一大假后，细胞里又出现了类似的状况。肉眼观察，培养液刚开始是清亮的，但表面飘有一层油渍样的无定形物质，如果不换液，时间一长就会混浊！后来经过仔细观初，40X镜下可见细胞间隙有针尖大小的小杆状的黑点，运动迅速。
我搜索了一下，好像有战友认为是“黑胶虫”，但也有战友认为是血清里的变性蛋白质！现在不管到底这些黑点是什么了，我准备用两种方法来处理：1.先用胰酶消化30秒，PBS冲洗三遍，然后再按照常规方法消化后换瓶培养；2.加入庆大霉素
本来还想按照其他战友的意见加入大扶康，可是比较贵，我还是先按照前两种方法处理吧！希望能有效阿！good luck to everyone!

yysr238[使用道具]
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发表于 2012-10-30 13:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

用的是哪里的血清？有没有做无菌测试？

jujuba[使用道具]
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发表于 2012-10-30 13:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问楼上的你们血清也做无菌测试吗??我们从没作过,只对培基做

8s5g[使用道具]
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发表于 2012-10-30 13:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们用的是国产血清，天津产的，对于血清没有作无菌测试，只是取了培养液在孵箱中培养，清亮，没有问题！
我的细胞最终还是扔掉了，唉，两种方法都不管用！等着毕业，没有时间来仔细研究了，希望有战友能战胜“黑胶虫”！
也曾打电话给invitrogen，可是他们的技术指导也没有说出什么来，不知道那位战友知道“黑胶虫”的英文名称？

jujuba[使用道具]
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发表于 2012-10-30 13:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我前段时间从天津的TBD（灏洋生物）买了一瓶血清，结果发现血清有严重的细菌污染；本市的其它研究者也发现同一批血清有问题，结果我们全部都退货了。
现在回想起来，我觉得我们还是很幸运的－－因为如果不经检测就使用了该血清。我们的损失就是数万元和几个月的时间。但由于在使用前的检测过程中发现了问题，我们的损失只是几十元罢了。