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标题:【求助】请大家帮忙分析：我的细胞发生了什么？

剪刀手520[使用道具]
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发表于 2012-10-30 15:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】请大家帮忙分析：我的细胞发生了什么？


我培养的是大鼠大脑的神经元，在今天之前还一切顺利，最后一次看到他们良好的状态是两天前，在培养后4天，每个细胞都表现良好，细胞体积增大，轴突伸出，互相连成网络，可今天（第6天）换液的时候一下子就变了样儿，轴突几乎全部消失，满视野全是圆圆的形状，就象刚接种的样子，全都缩回去了，怎么办啊？大家讨论了半天也没有找到原因，孵箱及培养液均没有问题，也没有污染的迹象，为什么一下就变成这样了？很心痛啊？大家快帮帮我吧！究竟发生了什么？
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剪刀手520[使用道具]
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发表于 2012-10-30 15:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
底四天换液的时候曾经拍照，大概在孵箱外放置了半个小时，这能导致这一切吗？
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xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2012-10-30 15:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

新鲜培养基的pH值对吗？
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剪刀手520[使用道具]
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发表于 2012-10-30 15:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

PH值没什么问题的，况且只有两天的时间不会有什么变化的？
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huifeng0516[使用道具]
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发表于 2012-10-30 15:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

6天才换一次液？有无接触抑制？是否细胞密度过大？
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园丁##[使用道具]
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发表于 2012-10-30 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

很可能是换液时候造成的.
神经细胞相当骄气, 对外界环境十分敏感.

我在换液时,十分小心,常常是1/2--1/3换液. (我常常对LP说, 我对神经细胞比对她都好.)

另外对PH值十分敏感, 有几次我在固定神经细胞后,总是发现神经元的突起都断裂或缩回了(屡试不爽!!), 最终我发现我的PA的PH竟然只有6.0, 跳到7.0后问题解决.
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剪刀手520[使用道具]
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发表于 2012-10-30 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢大家！承蒙大家照顾，我的细胞又恢复了，真不知是什么原因？象遇见了鬼一样！我多加了一点血清不知道是不是起了作用？
想请教主任一个问题1/2或者是1/3换液是什么原理啊？
另外神经细胞离开孵箱能坚持多久而对它没有损害啊？
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发表于 2012-10-30 15:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想1/2或者是1/3换液主要是给细胞一个逐步适应的过程，慢慢适应新的培养基环境，不知道对不对，赐教！
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发表于 2012-10-30 15:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

除非原培养液配方的营养因子不够，而增加血清一方面增加了生长营养因子，另一方面，血清对于比较敏感的细胞具有良好的保护作用，因此出现了生长反弹的现象。
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2012-10-30 15:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1/2换液的主要原因是因为细胞在生长的过程中回分泌出来一些生长促进因子，这也是为什么细胞培养的时候密度不能太小，还有筛选细胞的时候不能够换液太过频繁，以及有时候会有人用高密度细胞培养液来促进低密度细胞的生长的原因。
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