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我不了解你的具体情况，不过我从事细胞培养已有四、五年，下面我把我的一点经验告诉你，希望对你有所帮助：
常规胰蛋白酶消化法的步骤如下：1.倒掉培养液；2.D-Hanks或其他不含钙镁的平衡液溶液冲洗细胞3次；3.加预热的胰蛋白酶；4.培养箱放置数分钟（夏天室温超过30度可以不放入培养箱）；5.至细胞变成圆形，细胞间隙增大，甚至有时可以看到细胞呈流沙样从壁上滑下；6.吹打；7.离心
常规胰蛋白酶消化法中影响消化效果的因素有以下几个方面：1.胰蛋白酶的浓度；2.胰蛋白酶的温度，一般以37度为宜。预热过程中超过38度，会使胰蛋白酶失活，消化效力会大大的下降；胰蛋白酶温度越低，消化效力越差；反复冻融也会使胰酶活力下降。故建议你少量分装冻存。3.培养瓶的材质：一次性进口塑料培养瓶细胞贴壁比玻璃培养瓶要牢固得多，可适当增加胰酶浓度或加EDTA；4.血清和钙、镁离子：D-Hanks或其他不含钙镁的平衡液溶液冲洗细胞是必需步骤。
