【求助】是细菌污染吗？

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标题:【求助】是细菌污染吗？

kuohao17[使用道具]
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发表于 2012-10-31 12:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

刚过滤好的培养液作无菌检测时发现培养基变黄，但没有所说的腥味，请问是细菌污染吗？

mickeylin[使用道具]
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发表于 2012-10-31 12:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你是用空白培养液，放在培养箱里做”无菌检测”吗？

我们的经验：没有污染的，24h之内不会变混，或变黄。
若有变化，很可能已经污染，应该放弃。

lagua123[使用道具]
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发表于 2012-10-31 12:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

To play safe, just filter it again.

bohe221[使用道具]
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发表于 2012-10-31 12:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果培养液中有酚红等酸碱指示剂的话，放到CO2孵箱后由于CO2溶解在培养液中，导致PH值下降，培养变黄，是正常的现象。这种颜色改变在放入孵箱中几分钟后即可发生。
如果空白培养液颜色变黄是发生在培养后一两天的话，就要考虑是否污染，此时先对着灯看一看液体折光性，若浑浊，折光性差，或有絮状沉淀即可认为是细菌污染，此时建议重配培养液，因为原来的培养液经过几天的细菌繁殖，成分可能已改变，重新过滤只能除菌而不能恢复其原来的成分和PH值。如果折光性很好，培养液透亮，则需到显微镜下看看有无漂浮物，若完全没有浮游物则可认为没有污染，若有少量浮游物，建议再培养观察一两天，看看有没有浑浊现象。如果没有改变则可使用。前面观察到的漂浮物很有可能是吸管或者器皿上的黏附的纤维或其他物质，但经过消毒也能达到无菌状态。

pengke1983[使用道具]
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发表于 2012-10-31 12:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

几分钟就能让培养液变黄，太快了吧？
（我曾专门测过pH:酒红色约7－8, 橙红7，橙黄6，金黄<4)

我们配的1640＋10％NBS, 含有hepers,缓冲能力足以应付拿取细胞，镜下观察所需时间内，培养箱内外CO2的变化。正常情况下空白培养液放在培养箱里，24h之内绝不会有明显的颜色变化，更不会变黄（我亲自检验过两次）。

如果没有很好的缓冲能力，在短时间内，细胞反复经受pH变化，恐怕有损伤吧。

bohe221[使用道具]
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发表于 2012-10-31 12:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我用过DMEM(GIBCO)及MESENCULT（STEM CELL) 两种 .DMEM是我自己配的，配好的时候是PH7.2(PH计测的）比酒红要淡一些，介于wanglily0 所说的酒红和橙红之间。MESENCULT是买来就配好的现成的液体培养基，其基础培养液（就是没有加其他刺激剂的时候）在没有拆封的时候也是呈现出跟我刚配的DMEM相同的颜色。这两种培养液放在孵箱中确实几分钟就能变色，这是我自己观察到的现象。至于wanglily0说的缓冲剂我没有加，这可能是我的培养液颜色变化快的原因，但是我的细胞依然能够健康的成长。

另外，不同培养液在相同的PH值时表现的颜色是不相同的，只有在同种类，同批号的培养液配置时才可以根据颜色来判断酸碱度，前提时是你在第一次配的时候仔细的测量过。曾经有一个师兄在配1640（GIBCO)的时候，没有加NaHCO3的时候PH值就已经是八点多了，而颜色还是橙黄色的，这时候我们是应该相信颜色还是PH计呢?

pengke1983[使用道具]
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发表于 2012-10-31 12:51 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 bohe221 于 2012-10-31 12:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我用过DMEM(GIBCO)及MESENCULT（STEM CELL) 两种 .DMEM是我自己配的，配好的时候是PH7.2(PH计测的）比酒红要淡一些，介于wanglily0 所说的酒红和橙红之间。MESENCULT是买来就配好的现成的液体培养基，其基础培养液（就是没有加 ...

其它培养液的情况我不熟悉，但是RPMI 1640 据我所查的资料，大多是以酚红（Phenol red, Na）为酸碱指示剂，各种牌子的含量都是5.00mg/ml。

酚红变色范围 6.7～8.4 酸色－黄，碱色－红。
变色指示剂通常是比较敏感可靠的，是制酒和医药行业通行的一种检测方法。我们这的一位前辈曾介绍，国外一些试验室会专门配制几瓶不同pH值的空白培养液，方便对照。

下面是一些不同品牌1640的配方（红圈标出酚红）