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标题:【讨论帖】这是什么污染

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发表于 2012-10-31 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【讨论帖】这是什么污染

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DMEM高糖＋非必需氨基酸＋10％小牛血清＋1倍双抗，培养肿瘤细胞。第二天可见细胞内出现大量致密小黑颗粒，细胞生长很差，培养基颜色未变，不浑浊，但瓶底有一些类似于细胞裂片的很小的东西，稍显不清澈。过几天传代后，细胞不贴壁，开始大量悬浮死亡。
怀疑培养基污染，将其置于温箱两周，未见变化。测新鲜培养基pH值，稍高于7，应该无问题。


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 小中大
DMEM高糖＋非必需氨基酸＋10％小牛血清＋1倍双抗，培养肿瘤细胞。第二天可见细胞内出现大量致密小黑颗粒，细胞生长很差，培养基颜色未变，不浑浊，但瓶底有一些类似于细胞裂片的很小的东西，稍显不清澈。过几天传代后，细胞不贴壁，开始大量悬浮死亡。
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 小中大
DMEM高糖＋非必需氨基酸＋10％小牛血清＋1倍双抗，培养肿瘤细胞。第二天可见细胞内出现大量致密小黑颗粒，细胞生长很差，培养基颜色未变，不浑浊，但瓶底有一些类似于细胞裂片的很小的东西，稍显不清澈。过几天传代后，细胞不贴壁，开始大量悬浮死亡。
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 小中大
DMEM高糖＋非必需氨基酸＋10％小牛血清＋1倍双抗，培养肿瘤细胞。第二天可见细胞内出现大量致密小黑颗粒，细胞生长很差，培养基颜色未变，不浑浊，但瓶底有一些类似于细胞裂片的很小的东西，稍显不清澈。过几天传代后，细胞不贴壁，开始大量悬浮死亡。
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 小中大
DMEM高糖＋非必需氨基酸＋10％小牛血清＋1倍双抗，培养肿瘤细胞。第二天可见细胞内出现大量致密小黑颗粒，细胞生长很差，培养基颜色未变，不浑浊，但瓶底有一些类似于细胞裂片的很小的东西，稍显不清澈。过几天传代后，细胞不贴壁，开始大量悬浮死亡。
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发表于 2012-10-31 13:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

从图片看细胞的状态很差，但不象细菌污染，细胞状态原来怎样啊？如果只是在换用了这些培养基才出现，要考虑培养基的问题，比如血清是否灭活。
传代时使用的胰酶和EDTA的量是否太多消化时间太长，也可造成细胞受损伤。
除了细菌污染，还有支原体，还有黑胶虫，不妨丢掉再复苏一株细胞。
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 小中大

别人用1640养的很好的细胞，传给我一瓶，用DMEM养，顶多一个星期就不行了。我还是怀疑培养基不行。但不知什么污染。
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发表于 2012-10-31 13:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个不是细菌，支原体污染。见细胞内出现大量致密小黑颗粒，这是细胞死亡产生的。
应该和血清干系不大，挺你说细胞开始生长就不好，可能与胰酶消化无关。主要可能是：1，是不是你的容器清洗不干净？2。该细胞能不能用DMEM？3。水质4。PH 5。也有可能是用惯了1640，突然换成DMEM导致细胞不适应。
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发表于 2012-10-31 13:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我以前也碰到过类似的情况：在培养基中看到很多的小颗粒，在400倍下可以看到具体的形态，就象是两粒蚕豆拼在一起的样子。不知是否和你的一样。后来查了是血清中带入的。你可以先查一下血清。
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 小中大

我也曾经遇到过类似情况，细胞状态差，后来使用DAPI方法检测是支元体污染，从图片上看，与我上次的污染情形相似。建议检测一下支原体
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