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标题:【求助】有关明胶包被培养瓶

cocacola[使用道具]
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【求助】有关明胶包被培养瓶

哪位大侠知道如何用明胶宝贝培养瓶?请教具体方法!
明胶液体可否高压灭菌?急
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bohe221[使用道具]
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不知道你用多大浓度的明胶?我们用0.1%明胶包被培养板的时候是包被20分钟以上,吸弃残液就可以用了!培养瓶应该是一样的。

最好不要高压吧,0.22μ的滤膜过滤不也挺好的吗?
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ladyhuahua[使用道具]
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明胶溶液配好了以后,不能高压!因为高压后,明胶变性。可以配成0.1%-0.2%,溶解后0.22um滤膜抽滤。不过要多准备几个滤器,因为比较难抽。使用时,加上明胶,覆盖培养平面即可。置于培养室中1-24h,取出,弃去液体,用培养基洗一遍即可。
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one[使用道具]
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你们是不是用来分离外周血单核细胞?我只看到一篇文献说这样可提高单核细胞的产量,不知方法可靠否?
我今天看到分子科隆上有明胶液高压灭菌的。
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明胶溶液可以高压(不怕变性,有可溶的和不可溶的,可用sigma的,不贵。另外,二者均可高压后使用,我都试过),用PBS配。浓度在0.5-2%均可。将3-5ml明胶PBS放在培养瓶中,培养箱中包被1h以上,能过夜是最好的。用前取出,吸弃明胶,加入1-2ml培养液(10%血清即可)冲洗,稍微吹干即可使用,培养效果甚佳。
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pencil菲[使用道具]
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大侠,请留步!不知你参考的资料是哪个,可否发过来?原理可否讲解一二?用水配明胶液可否?包被后的培养瓶是不是要干燥一个礼拜以上?
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zwsyrt[使用道具]
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抱歉,这是我师兄做了3年实验和我养3年细胞的经验,书上并无详细说明。具体原理可以参考《细胞实验指南》(冷泉港实验室),明胶的主要成分是I型胶原,铺胶包被后,可以促进细胞增殖、迁移,而且价格便宜,因而用于包被很是适宜。理论上说,用水配也没有什么大不了的,但是最后一定要用培养液洗一下(有的文献认为血清中的蛋白可以中和一下的)。我习惯用PBS配,实验条件固定了,就没有去改过了。包被的培养瓶不需要干燥那么久,如果是塑料培养瓶只需稍微干燥(通常我就在超净台中,吹5-10分钟而已),玻璃类的30min就可以了,其实个人认为,干燥并非非常重要,而主要在于包被,务必放在温箱中。另外,还取决于细胞种类,我以前养的是内皮,娇气一些。如果是肿瘤细胞养在玻璃片上,都不需要吹干,包被后洗完就用即可使用。我觉得我回答得很清楚了,就不给你发邮件了。
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pencil菲[使用道具]
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多谢大侠相助,我确是没看见这方面的资料。
指看见一篇文献说要包被7-10天,然后倒去明胶液,在37度干一周以上。文章说这样可使外周血单核细胞帖壁的量增加,我怕做不出来,没有见其它文章。
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windy+++[使用道具]
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如果这样,那你就包被过夜,吹干半小时到一小时吧,瓶子用塑料瓶。原代接种后,让细胞多贴几天(3天),绝对静止不动,血清给点好的胎牛,相信一定能贴得很牢固的。另外,你制备原代细胞时,尽量不要对细胞损伤太厉害,比如挑个好点的离心机,离心转速不要太高,适当可以采用低温或者4度,尽快接种到培养瓶中等等。祝你成功!
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pencil菲[使用道具]
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多谢大侠,接种细胞前是否要用培养基预培养一下包被的培养瓶?
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