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标题:【求助】细胞污染？

duoduo[使用道具]
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发表于 2012-10-31 17:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】细胞污染？

常规培养（用G418筛选）的转染质粒的细胞大约一月，近期细胞状态极为不好，经过仔细排查，
我们发现细胞中可能有污染，但是无法确定是何种微生物？
如图所示：
图1：（200倍光镜）细胞状态不佳，细胞旁边有成堆的透亮圆颗粒状微生物（黑圈标记），我们使用青霉素（100U/ml）和链霉素(25ug/ml)加入培养基培养数日，这种东西仍不减少！


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duoduo[使用道具]
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发表于 2012-10-31 17:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

图2：（400倍光镜）


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发表于 2012-10-31 17:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有人说是细胞碎片，但是非常不象！似乎小园形东西外面还有一层包膜！
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发表于 2012-10-31 17:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

抗不太清楚，像真菌。看看它是不是再长？
野可能不是污染，是碎片
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dog002[使用道具]
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发表于 2012-10-31 17:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
Have you ever seen such fragments of cells ?
It is alive!
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发表于 2012-10-31 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我认为细胞最近生长缓慢一般有如下几个原因：
一、细胞本身传代次数太多
二、细胞培养液的问题，包括血清的浓度和质量有无污染、培养基的PH值
三、是各种途径来源的污染。
根据照片提供，本人认为存在污染的可能性很大，从形态上要考虑支原体污染。支原体污染多来自于血清。建议更换血清，包括重新灭活。
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发表于 2012-10-31 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
常规培养（用G418筛选）的转染质粒的细胞大约一月，近期细胞状态极为不好，经过仔细排查，
我们发现细胞中可能有污染，但是无法确定是何种微生物？
如图所示：
图1：（200倍光镜）细胞状态不佳，细胞旁边有成堆的透亮圆颗粒状微生物（黑圈标记），我们使用青霉素（100U/ml）和链霉素(25ug/ml)加入培养基培养数日，这种东西仍不减少！

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我认为细胞最近生长缓慢一般有如下几个原因：
一、细胞本身传代次数太多
二、细胞培养液的问题，包括血清的浓度和质量有无污染、培养基的PH值
三、是各种途径来源的污染。
根据照片提供，本人认为存在污染的可能性很大，从形态上要考虑支原体污染。支原体污染多来自于血清。建议更换血清，包括重新灭活。
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发表于 2012-10-31 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们用的血清应该没问题的。
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发表于 2012-10-31 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这种污染不剧烈,也不会让培养液混烛,
可以生长在细胞内部,
也可以才培养液中漂浮,
也可以粘在细胞瓶底部呈现出很亮的点,而且大小不一
扩散速度慢.
但是细胞感染后传代速度明显减慢,甚至传代后,细胞很难长起来
血清也很清亮,看不出污染
如果我多描述的和你看到的一样

这应该是一种污染
因为我的细胞出的问题和你的一样
而且我的判断是血清出的问题
因为我以前遇到了一次,更换血清后
细胞虽然死很多瓶
但是没有绝种

解决的方法只能是找状态比较好的,用胰蛋白酶处理,
瓶子中剩下的细胞如果能长起来,这就是比较幸运的,
最初给连续换液2-3次之后就不要再动了
因为细胞动的频繁了,也不利于细胞的状态恢复
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nn255[使用道具]
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发表于 2012-10-31 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你仔细观察一下,停用G418后小园电是否会长大,可能是G418对细胞生长的影响.取部分细胞分瓶,将小牛浓度加大,或用胎牛.支原体污染似乎在光镜下不易看到.祝你好运
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