【求助】复苏的细胞不贴壁，怎么回事？

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标题:【求助】复苏的细胞不贴壁，怎么回事？

wu11998866[使用道具]
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发表于 2012-11-2 12:32 资料个人空间短消息加为好友

小中大

最近复苏了好几次BHK细胞，每次都发现贴壁的很少，根本不能存活。培养液也重配过，不应该是液的问题，各种量都是以冻存前的，不该有问题。各位高手，帮忙分析一下，影响细胞贴壁的原因有哪些？

BUK[使用道具]
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发表于 2012-11-2 12:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

细胞不好贴壁的原因我认为有几点：
1.这段时间气候有一定的影响，我的细胞也是一样，同样的条件却长得很差
2.你的细胞状态可能不是很好
3.可以涂布多聚赖氨酸
4.换液时间延长，尽量不要用力摇动。
5.尽量缩短复苏时间
6.操作的环境温度最好不要变动太多。

gmjghh[使用道具]
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发表于 2012-11-2 12:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1.复苏后洗涤一下,毕竟DMSO影响细胞的生长;
2.最好用塑料瓶培养,如果是玻璃瓶,那么可以用鼠尾胶原包被一下培养瓶,或者用盐酸对培养瓶进行蚀刻,效果应该还可以;
3.还有就是你的冻存的细胞是否是完全死了,如果是的话是不可能贴壁的,因此在复苏后我建议你用台盼兰染色看一下死细胞和活细胞的数目及比例.

fsdd817[使用道具]
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发表于 2012-11-2 12:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

也許可以改塗collagen?

wu11998866[使用道具]
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发表于 2012-11-2 12:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢各位。我发现有少量贴壁，但是稍微一晃细胞就下来了，我现在也怀疑是细胞的问题。我们的细胞冻存在-80度，中间进行过一次清理冰箱可能影响了它。

wu11998866[使用道具]
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发表于 2012-11-2 12:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

3.可以涂布多聚赖氨酸

————————————————————

涂布多聚赖氨酸有什么作用，不懂

gmjghh[使用道具]
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发表于 2012-11-2 12:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 wu11998866 于 2012-11-2 12:35 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
3.可以涂布多聚赖氨酸

————————————————————

涂布多聚赖氨酸有什么作用，不懂

促进贴壁。

S6044[使用道具]
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发表于 2012-11-2 12:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

Poly-Lysines for cell culture

Poly-Lysine is a charge enhancer.
Poly-Lysine enhances electrostatic interaction between negatively-charged ions
of the cell membrane and positively-charged surface ions of attachment factors
on the culture surface. When adsorbed to the culture surface, it increases the
number of positively charged sites available for cell binding.

Certain cells can digest poly-L-lysine, in which case
the poly-D-lysine should be used.

从sigma药厂网站找来的资料

S6044[使用道具]
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发表于 2012-11-2 12:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

塗 fibronectin/collagen /BSA，也可以幫助細胞貼附

duoduo[使用道具]
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发表于 2012-11-2 12:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1.细胞的活力有问题.
2.复苏时解冻时间太长,细胞受损.
3.如果你的细胞是用液氮冻存,看一下是否液氮没了,从而影响了细胞的活力.

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