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标题:【求助】最近细胞总是污染，怎么办！

jujuba[使用道具]
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发表于 2012-11-2 14:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】最近细胞总是污染，怎么办！


各位：我最近养CHO-HUK细胞，这一个月来总是污染，有时是细密的东西，像是细菌；有时是霉菌，刚过滤的2000ml培养基都污染了，可以明显看到白色的菌落生长；再就是我的胎牛血清过期了一个月，发现里边有许多漂浮的异物，在镜下看是许多弯曲的东西，在孵箱里培养一天便混浊，应该也是细菌污染。我想请问：血清过期和污染有没有必然的联系？在这样潮湿闷热的天气里应该怎样预防和控制污染，大家有什么好办法？
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bohe221[使用道具]
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发表于 2012-11-2 14:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能的原因：
1.天气太热，实验者在培养和接种或者换液时出汗（有空调稍好，但是手也出汗）。
2.培养间里可能暗藏污染原。
3.注意培养箱（这点最重要），仔细检查培养箱里的隔板的下面，有可能有霉菌斑。（我以前遇到过）
4.培养基污染多数是配置过程中造成的，仔细检查配置过程用到的器具。
5.血清过期一个月，如果保存的好应该没有问题，但是保存不好，新来的血清，用一次就可能污染。血清过期和污染是否有必然的联系不好说，个人体会觉得其联系不大。
解决办法：
1.彻底清洁培养间，显微镜室。然后，紫外灯多照射一端时间消毒空气。
2.彻底清洁培养箱：（1）每个隔板仔细清洗，火烤。（2）培养箱大换水，换成新鲜干净的蒸馏水。（3）培养箱内壁用酒精棉球或者稀过氧乙酸认真擦洗。（4）紫外灯长时间照射（一天）。
3.实验用器械消毒：注意消毒时间和压力，有必要检查压力锅和校正压力表是否准确。
4.一次性手套在打开使用前一天放入无菌间照射消毒。
5.如果用双抗，应该现用现配。
6.注意过滤器的消毒灭菌。
7.过期的血清，可以做培养检查是否被污染。如有怀疑，建议不用。
8.检查培养间和超净台的通风过滤网，如果脏了，需要更换。
总之，潮湿闷热天气培养细胞非常容易污染，必须注意每一个环节。具体的可能造成污染的环节，还得要自己体会查找。
祝实验顺利！
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abc816[使用道具]
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发表于 2012-11-2 14:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1 用碘伏仔细擦洗浮箱和操作台，地面，然后用紫外灯照1小时
2处理完细胞放回浮箱是用酒精棉擦培养瓶的底部
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克隆鱼[使用道具]
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发表于 2012-11-2 14:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的一瓶价钱不是很贵的血清，用后总是发现培养基中有很细小的类似细菌污染的东西，但是培养液又不很快变浑，不像细菌污染，细胞长的也慢，现在想想也许就是血清的问题吧，养细胞血清的选择还是很重要。

避免污染，我认为：
1、每次做完实验，超净台要用酒精喷擦；打开紫外线照射；
2、严格无菌操作；
3、孵箱定期清洗，换水；
4、每次观察细胞后，酒精喷瓶口；
5、培养瓶最好放在一个托盘上，然后在放入孵箱。托盘是高压蒸汽消毒过的。
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moonlight45[使用道具]
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发表于 2012-11-2 14:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
各位：我最近养CHO-HUK细胞，这一个月来总是污染，有时是细密的东西，像是细菌；有时是霉菌，刚过滤的2000ml培养基都污染了，可以明显看到白色的菌落生长；再就是我的胎牛血清过期了一个月，发现里边有许多漂浮的异物，在镜下看是许多弯曲的东西，在孵箱里培养一天便混浊，应该也是细菌污染。我想请问：血清过期和污染有没有必然的联系？在这样潮湿闷热的天气里应该怎样预防和控制污染，大家有什么好办法？

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看来应该大扫除了。
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HP007[使用道具]
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发表于 2012-11-2 14:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多谢楼上各位的提醒，想想还是自己的无菌工作和细胞培养的经验方面有欠缺，在今后的实验中我会多加注意。
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发表于 2012-11-2 14:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

discard all the contaminated cells
discard all the suspensed solution
prepare new stock
heat up the incubator to 180C for 3 hour
clean up everything

that is what i did
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bamboo16[使用道具]
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发表于 2012-11-2 14:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

防止细胞污染很简单，只要按照外科手术的操作原则进行无菌才操作，保证污染不了。
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jujuba[使用道具]
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发表于 2012-11-2 14:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有 一个 问题，就是血清用之前是否灭活过。很多公司的血清 ，分装 之前 需要灭活，不是一定要灭活 的，但如果 你 没有 灭活，即使没有污染，镜下也 可见 许多 漂浮物，一般为 衣原体、支原体等，建议血清分装前，56度水浴 灭活30分钟。
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发表于 2012-11-2 14:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

"如果 你 没有 灭活，即使没有污染，镜下也 可见 许多 漂浮物，一般为 衣原体、支原体等"

倒置显微镜一般是看不到"许多 漂浮物，一般为 衣原体、支原体等"的,关于血清污染:买回来后(进口的一般不需要灭活),溶解后分装一小瓶,培养箱里72 h 以上,即可看到污染与否(没有污染的应该是透明度很好的).如果有问题,就退货,没有话说.如果发现溶解后即可看到明显的漂浮生物,呢就不用我说了塞~~~~~~使用过程中,最好分成小瓶,用个1 周左右,4 度保存!反复冻融,对其效果和性状有影响.
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