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标题:【求助】已经快崩溃了~~~```

fei1226com[使用道具]
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发表于 2012-11-2 15:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】已经快崩溃了~~~```

又发现细胞污染
不明原因
软骨细胞primary culture
自病人软骨组织中分离

在高倍镜下可看见有东西在蠕动
培养也不变混浊
细胞生长情况差

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remenb[使用道具]
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发表于 2012-11-2 15:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

细胞培养过程中的无菌操作技术是最基本同时也是最重要的技术。判断污染的方法很多，按书上写的包括培养基变浑浊，细胞死亡，培养基明显变酸以及高倍镜下见到污染的细菌或真菌等。但根据我个人的经验，判断污染的上述标准均不是绝对可靠，最可靠的标准是细胞活力，如果细胞活力明显下降或扩增缓慢，即使未出现上述书上写的情况也高度怀疑污染（不一定是细菌或真菌，可能还有支原体）所以我劝你放弃这组细胞，不要为已打翻的牛奶哭泣。重新试验，避免无谓的浪费时间。细胞污染本身并不可怕，可怕的找不到污染的原因。建议你多找找原因，避免以后的实验出现同样的错误。
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2012-11-2 15:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢鼓励~~
你说得我都懂
现在就是找不到污染的原因
3个月前做primary culture一切都是顺利的
之后出现过一次明显的细菌污染
之后就一发不可收拾
已经不是像原先的细菌污染
而是不断出现细胞生长缓慢，they look unhappy.
（附上图片）
已经重重复复的扔掉好多细胞，清理细胞培养室
但是问题不断出现，应该找到解决的方法，要不然，毕业都难了~~~
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2012-11-2 15:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

软骨细胞
自软骨组织分离第5天
换液两次
培养液不浑浊
可见细胞死亡

使用一次性培养器具
DMEM/F-12


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附件
2012-11-2 15:20
55108502.snap.jpg (19.35 KB)
 
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2012-11-2 15:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这已经是重新做的试验了
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发表于 2012-11-2 15:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

试验室中其他人的情况如何？
您那里 的液体是自己配自己用，还是统一配好一块用？
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发表于 2012-11-2 15:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我建议你把细胞培养间，操净台，包括培养箱好好清扫一下，细胞间和操净台再用紫外灯灭几个小时．也许会好．我有一阵老污染，处理后就好了．
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taoshengyijiu[使用道具]
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发表于 2012-11-2 15:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个实验室只有两三个人在用，主要用于primary culture
另外在用的一个人比我还仔细
我们已经清理了实验室好几次了
包括用ethonal彻底擦培养箱，加热到180度3个小时进行消毒等
fume hood也每次使用后都用紫外灯照射

其他的cell line在另外一件培养室，那里可以说是环境恶劣
他们偶尔会出现细菌感染
但是扔掉细胞之后就没事了

用的D-MEM/F-12 Medium from Gibco, New York, USA
都是自己配自己的

另外还有一些细胞是从一个专门从事自体软骨细胞移植的公司拿的
他们的细胞培养后要用回到人体，所以污染控制非常严格
但是在这个实验室培养后也出现不明的微生物
真是不明白是怎么回事

我们用的抗生素是: gentamcin and pen/stret
一开始用p/s，后来出现污染之后曾经怀疑是支原体感染
换了gentamcin，并没有得到改善
同时送样品去microbiology检测，枝原体阴性

问：能不能同时用gentamcin and pen/stret, 会不会杀死细胞？？

现在还有一个软骨组织在温箱里，都不知道该不该继续做下去了~~~！！！
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发表于 2012-11-2 15:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1.把什么东西加热到180度3个小时？
2。培养箱擦后要用紫外灯照，箱内金属隔板擦后用火烤。
3。fume hood用前照射吗？
4。检查超净台上面的过虑网，如果太脏，换。
5。注意试验操作细节。
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wmp1234[使用道具]
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发表于 2012-11-2 15:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1.把什么东西加热到180度3个小时？

它有一个self sterlize system, 可以进行加热，这样就不用用火烤了吧？
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