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标题:【求助】细胞传代时吹打的技巧

flower-201[使用道具]
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发表于 2012-11-3 12:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】细胞传代时吹打的技巧


请问大家细胞传代时吹打的时间或次数
我掌握的不好，
吹少了细胞成团较多
吹多了又怕细胞损伤
谢谢大家介绍点经验
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白白的[使用道具]
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发表于 2012-11-3 12:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

主要是消化的关系,要是胰酶活力高,消化时间合适, 对大多数培养细胞来说很容易很得到单细胞悬液; 所以要自己摸条件, 总结或借鉴经验,
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黄花菜[使用道具]
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发表于 2012-11-3 12:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

同意楼上的意见。胰酶要配好，并且加上EDTA，胰酶质量要好，这样对细胞的损伤较少，另外消化得也好。
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dotaaa[使用道具]
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发表于 2012-11-3 12:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用弯头吸管吹打即可充分冲到培养瓶的各个角落,而且又不容易造成太多气泡从而可以减少对细胞的伤害.
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yysr238[使用道具]
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发表于 2012-11-3 12:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

注意吹出的液体流先吹在壁上，通过反弹力从侧面把细胞冲起
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nn255[使用道具]
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发表于 2012-11-3 12:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也掌握的不好，养的悬浮细胞，但是吹打不下来，稍微有点贴壁的
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发表于 2012-11-3 12:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

关键还是消化！
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发表于 2012-11-3 12:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

每次消化细胞前，用D-hank's液冲洗一遍，去除残留的血清，这样可以提高胰酶的消化能力。加入胰酶后，边消化边在显微镜下观察。发现大部分细胞间开始出现裂隙，细胞胞膜开始收缩时，可去掉胰酶或直接加入适量含血清培养基吹打。如果此现象出现较慢，可将含胰酶的培养瓶放于37度孵箱，1-2到两分钟。吹打时，按顺序吹遍每个角落，基本上两到三遍细胞就会吹下来，不会成团。如果仍有成团，可再吹打溶液数次。这种操作不会损伤很多细胞，故也不必过于担心。
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jujuba[使用道具]
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发表于 2012-11-3 12:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉得吹打不下来还有一个可能是细胞长老了。所以平时掌握的姨酶作用的时间应该相应的增加的。
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9900[使用道具]
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发表于 2012-11-3 12:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

在37度消化 胰酶要预热 不要在超净台里消化
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