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标题:【求助】MCF-7细胞的培养

98776langtao[使用道具]
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发表于 2012-11-3 13:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】MCF-7细胞的培养


我在养MCF-7细胞，用的是无酚红的DMEM加10％胎牛血清。有几个问题想讨论一下，究竟几天换液合适？还有消化的时候怎样才能消化的比较开（尽量单细胞状态）？
我的经验是接种密度要大，换液勤，但消化这块不是很好，我用的是胰酶，听人说用胰酶加EDTA效果较好，有经验的战友不妨谈谈
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98776langtao[使用道具]
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发表于 2012-11-3 13:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
消化就用胰酶能消化到单细胞状态吗？我好像挺难的，消化时间也挺长，而且吹打了暴长时间

另：我的细胞复苏的时候好像不好贴壁，你的经验复苏多长时间后就能贴壁？
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一叶[使用道具]
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发表于 2012-11-3 13:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
24hrs enough 就能贴壁
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发表于 2012-11-3 13:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那不贴一般是什么原因？还有养的时候到底要不要加胰岛素？我看文献好像也有分歧
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98776langtao[使用道具]
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发表于 2012-11-3 13:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想选MCF-7来养,不过究竟用哪种培养基好呢,我看文献上有用1640和DMEM的,血清也有用胎牛也有小牛的,(我这里有很多1640,所以不想浪费再购DMEM,但是不知道怎样.)
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whitesheep[使用道具]
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发表于 2012-11-3 13:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我当时也很糊涂，看文献用什么养的都有，后来问了人好像都可以，我因为要用无酚红的，就用了无酚红的DMEM.血清好像也无所谓，都可以，当然胎牛的好
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一叶[使用道具]
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发表于 2012-11-3 13:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

no need insulin.

DEME is the normal for MCF-7 ( if no phenol red we call it white medium)

FCS=FBS

那不贴一般是什么原因？many reasons. The common reason is contamination.

throw away with all of your medium DPBS trypsin FCS if any that left
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一叶[使用道具]
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发表于 2012-11-3 13:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

remind you that if you use 无酚红的 medium , you need treat your FCS prehandly

called DCC-FCS, Dextan-Charcol FCS
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发表于 2012-11-3 13:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我同学养大肠癌细胞，消化用0.25%胰酶加0.02%EDTA,她原来用的胰酶不好,以致消化用很长时间,还不能成单个,细胞生长极差,后来换用新胰酶就好了.
你们的MCF-7是从哪里买的,哪里价廉物美,推荐一下
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小野花[使用道具]
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发表于 2012-11-3 13:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以在中科学院细胞所购买，但物美价廉就不得而知了，^_^
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