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标题:【求助】骨髓基质细胞培养？

爬呀爬[使用道具]
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发表于 2012-11-3 13:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】骨髓基质细胞培养？


我的骨髓细胞分离后，不计数，接种在两个培养瓶内，72h首次换液，以后隔3天换一次，到第13天或14天，消化，但消化不下来，郁闷！那位有更好的骨髓基质细胞培养方法？不吝赐教!多谢！
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windy+++[使用道具]
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发表于 2012-11-3 13:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最好的骨髓基质细胞培养方法当然要属STEMCELL CO.的MESENCULT培养方法了,只不过价钱贵点.如果你需要该培养基的方案的话,我可安排给你MAIL一份.
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zhezhe[使用道具]
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发表于 2012-11-3 13:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你应该将首次换液时间提前，因为如果首次换液时间推后，这时会有很多单核细胞贴壁，而单核细胞如果原代培养十几天就很难消化下来，这就是你的问题所在，同时，你得到的细胞纯度也很低。
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爬呀爬[使用道具]
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发表于 2012-11-3 13:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想获得骨髓基质细胞，你说的消化不下来是单核细胞？那我得骨髓基质细胞在那里？用目前贴壁法我该如何做才能获得较纯的骨髓基质细胞？谢谢！
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爬呀爬[使用道具]
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发表于 2012-11-3 13:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你应该将首次换液时间提前，因为如果首次换液时间推后，这时会有很多单核细胞贴壁，而单核细胞如果原代培养十几天就很难消化下来，这就是你的问题所在，同时，你得到的细胞纯度也很低。

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我想获得骨髓基质细胞，你说的消化不下来是单核细胞？那我得骨髓基质细胞在那里？用目前贴壁法我该如何做才能获得较纯的骨髓基质细胞？谢谢！
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jujuba[使用道具]
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发表于 2012-11-3 13:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
骨髓基质细胞应该在24小时内贴壁，骨髓单核细胞在48小时-72小时贴壁，因此你如果在72小时首次换液，所得到的基质细胞里就会含有大量的单核细胞，而这些单核细胞占用了大量空间，就会影响基质细胞的生长。所以建议你在24小时后换液！！！
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发表于 2012-11-3 14:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你是分离骨髓有核细胞的马？你是在接种的时候就计数的吗？那么24小时换液不是细胞很少了吗？你用什么培养基？你具体操作能告诉我吗？多谢！
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mimili_901[使用道具]
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发表于 2012-11-3 14:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼上的能不能给我一份骨髓基质细胞的培养方案
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hold住[使用道具]
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发表于 2012-11-3 14:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用Ｐｅｒｃｏｌ(Ｐｈａｒｍａｃｉａ)分离液密度梯度离心应该纯点吧
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发表于 2012-11-3 14:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不知道楼主是从事哪方面研究的，从我们血液学的角度来讲，用淋巴细胞分离液分离出来的是单个核细胞，这种单个核细胞采用不同的方法进行培养将得到不同的培养细胞，培养骨髓基质细胞应该采用标准的DEXTER法进行培养，我们实验室传统的培养方法用的是1640（和DMEM）＋10％小牛血清＋12.5％马血清＋10－6mmol/L氢考，如果长得不是特别好，还可以加10ng/ml的bFGF，首次换液以培养后48小时为宜，骨髓基质细胞很好养，有人形容象“养草”一样，祝你成功！
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