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标题:【求助】我的培养液PH值怎么总是偏碱？

周伯通pp[使用道具]
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发表于 2012-11-3 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】我的培养液PH值怎么总是偏碱？

我养的是成纤维细胞，用DMEM培养液，刚配好时PH值是7.1。第一次养细胞挺好，可是后来取了几次材都养不出来细胞来了，发现培养液呈紫红色，测PH值，成8.2了！！就重新调PH值，到7.15，颜色纯正了。一个月后，发现又变紫红了，测PH值，测得正在用的一瓶是8.4，过滤后封口再一直没打开的变成7.6。
我又重新调PH值了，调到7.10，过滤后不到7.3。配了50ml新鲜的DMEM+10%胎牛血清，放在4C，平常换液用，刚一周，发现又开始变紫了。又着急又害怕。
我是买的Gibco的干粉，小包装，可以配1升，当时有的同学说需要加NaHCO3 3.7g，Hepes 2.4g，再加双抗。也有的同学说没必要加Hepes，最后我就真没加。会不会跟这有关系？真的不胜其烦。每次都是麻烦导师从临床上取材，可是细胞总养不出来，无言、无颜啊！

请各位同仁请教了！
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youyou99[使用道具]
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发表于 2012-11-3 16:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不会是你的瓶子有问题吧
hepes不要加
你的培养基怎么能存一个月啊。现配啊。验菌后立刻用掉。
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yjf1026[使用道具]
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发表于 2012-11-3 16:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
调PH值的时间长一些,一般培养基要搅拌6小时.
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ffooll[使用道具]
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发表于 2012-11-3 16:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不知道你的培养基隔多长的时间换液，最长不能超过三天。
配好的培养基如果在一周之内能用完，可以放在4度保存，如果不能就得放在－20度，这样放得久一点。
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hyuu[使用道具]
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发表于 2012-11-3 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

“调PH值的时间长一些,一般培养基要搅拌6小时.”
这样配不对吧？
应当是用接近终体积的容器配制，溶解调pH后不要过量搅拌，尽快过滤除菌后冰箱内冷藏保存。培养基要注意避光。
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hyuu[使用道具]
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发表于 2012-11-3 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的经验是Milli－Q级水，配制Gibco DMEM高糖，初始pH为7.8左右。HCl或HEPES调pH7.2，过滤除菌。
培养基在温育时因HCO3-分解，pH会升高。储存的培养基应尽量装满容器，可减少HCO3-分解。
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bongte[使用道具]
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发表于 2012-11-3 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不知道你测pH值的时候是否将培养液升温后操作，温度的培养液的pH值有重要影响。正常按照说明书配制培养液溶液的pH不会差很多，建议将配好的液体在培养箱中平衡4小时以上以后再检测pH，然后再决定是否调整培养液的pH。
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周伯通pp[使用道具]
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发表于 2012-11-3 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢你的回复。那如果不调PH值，在氟箱里，二氧化碳会自己溶在培养液里，使PH值降低吗？我觉得现在加了胎牛血清的培养液颜色又开始有点紫红了。
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周伯通pp[使用道具]
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发表于 2012-11-3 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢大家。根据大家的建议，再加上这几次被折腾出来的经验，我想有这么几点要注意：
1.现在用的装培养液的瓶子确实太大，是250ml，一般在4c放一个月才能用完。马上换成小瓶的。（其余放－20c）。而且应尽量装满。
2.用的时候动作迅速，尽量减少跟空气接触的时间。
3.测PH：培养液在培养箱中平衡4小时以上再检测，然后再决定是否需要调整。
4..下次再配培养液时，可以试试加点HEPES，增加缓冲能力。
5.过滤一点HCL、NAHCO3，备用。（省得PH再不准时用有菌的酸碱调了之后还得过滤培养液）
对吗？谢谢大家。
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tuuu2[使用道具]
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发表于 2012-11-3 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

DMEM可以-20度保存么？
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