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标题:【讨论帖】细胞培养中常见的误区

nut6694[使用道具]
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【讨论帖】细胞培养中常见的误区


相关疾病:
肿瘤
先介绍几个基本概念:

1、原代培养 (primary culture):是指从动物或人体机体组织/体液等中取出细胞摹拟体内环境,在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下进行培养,使其生长繁殖,并维持其结构和功能的一种培养技术。原代培养的细胞生长比较缓慢,而且繁殖一定的代数后停止生长,一般不超过60-70代。将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代或传代培养(Passage)。

2、细胞株(Cell Strain):通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物称为细胞株。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。如果不能继续传代或传代数有限,称为有限细胞株(finitecell strain);如果可以连续传代,称为连续细胞株(continuous cell strain)。对于人类肿瘤细胞,在体外培养半年以上,生长稳定,并连续传代的即可称为连续性株或系。

3、细胞系(cell line):原代培养经传代培养建立的、在培养条件下可无限繁殖的细胞群,在培养过程中发生突变或转化,故通常具有非整倍体细胞和各个细胞的核型不完全相同特征。

4、克隆(clone):对细胞来说,克隆是指由同一个祖先细胞通过有丝分裂产生的遗传性状一致的细胞群。
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先介绍几个基本概念:

1、原代培养 (primary culture):是指从动物或人体机体组织/体液等中取出细胞摹拟体内环境,在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下进行培养,使其生长繁殖,并维持其结构和功能的一种培养技术。原代培养的细胞生长比较缓慢,而且繁殖一定的代数后停止生长,一般不超过60-70代。将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代或传代培养(Passage)。

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我也补充一下:
在国外,原代细胞传代一般用“population doublings”来描述,有“扩增”的意思。原代细胞从第一代扩增到第16代左右能保持其原代特性,再增加population doublings次数后,其原代特性会发生变化。
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谢谢生物迷的参与!
下面再谈一下关于细胞培养中CO2浓度的问题:
虽然大多数培养基需要在5% CO2环境下维持其pH值为7.4左右,但DMEM中由于碳酸氢盐含量较高,其最佳的CO2浓度为10%,否则在5% CO2条件下,其pH值往往在数日内维持在7.6左右,而一般细胞培养时1-2天就需要换液(即使换液周期很长,也容易造成刚换好液时细胞环境中的pH值与先前比较有较大的变化),所以有时需要加入25 mM的HEPES,或者将CO2浓度调整为7.5%-10%。
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细胞培养分组实验
加处理因素时,注意设置对照,如:
1,细胞因子A /溶剂B,那么实验分组至少应该有(不考虑剂量、时间):
G1--Cells
G2--Cells+溶剂B
G3--Cells+细胞因子A /溶剂B

2,转染实验(脂质体介导):
G 1--Cells
G2--Cells+脂质体
G3--Cells+空载/脂质体
G4--Cells+含目的基因表达载体/脂质体
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细胞传代之消化误区:
很多人认为细胞传代时,胰酶作用少许时间,即可去掉大部分胰酶,继续让细胞慢慢消化,认为这样对细胞的损伤小. 其实不尽然, 我个人认为:细胞消化时间快,这样做没什么问题,但是如果细胞需要较长的消化时间(如上皮细胞,消化下来需要5分钟),我想此法并不可取.因为去掉大部分胰酶,使细胞干涸较久,这样对细胞也不好.
以上只是本人养细胞之拙见. 望多指教!!
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nut6694[使用道具]
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多谢你的参与,同意其观点,千万别让细胞干掉。
不过消化传代的时间控制主要通过镜下观察,细胞突起收缩即可弃去胰酶,然后加含有血清的完全培液即可,如果消化液中含有EDTA,则建议离心处理。
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7
 

不会吧,不是在短距离细胞运输的时候,有个方法是把培养液体全部倒掉放在胸部口袋里运输的吗.仅靠附着于细胞表面的培养液体,可使细胞短时间不至损伤吗?这样的话还存在你们所说的干涸问题吗?
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nut6694[使用道具]
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短距离运输时要装满培液,怎么变成倒掉培液了?
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nut6694[使用道具]
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诱导凋亡的基因稳转是不可能筛到克隆的,只能以瞬转进行实验。

当然选用特殊的表达载体也是可以进行实验的,如Tet系统
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短距离运输时装满培液,就行,那能倒掉咧??
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