小中大互帮互助了。：——）
先用无菌眼科剪剪碎，组织块越小越好，然后用0.05% collegenase，37度消化，如果放在离心管中可以每隔3－5min振荡一下，一般20－30min后，轻柔吹打数次，无肉眼可见团块后，离心。NH4Cl，4度，静止3min。4度离心，去除红细胞。然后就是洗细胞了。其实过程很简单。目前也没看到谁有更好的方法分离成人小块肝组织的细胞，活率不会很高了，起码和灌流是没法比。而且活率的高低重要的在于组织离体的时间长短。如果你是要做细胞的平面培养，从开始就要准备好胶原铺板的培养皿，计数后就直接接种到胶原覆盖的培养皿中，否则肝细胞很难贴壁生长。想要传代基本没可能，传代1－2次后，主要就是成纤维样细胞生长了，典型的肝细胞会逐渐消失。当然你可以使用各种因子或是立体培养来延长细胞的生长时间和长期维持功能。我看到文献上有立体培养到四五十天仍然有合成白蛋白的功能的。但平面培养，1－2周基本就不行了。一旦开始培养，如果没有特别的培养环境，功能迅速下降。总的来说，成人肝细胞在体外既不好分又不好养，祝你好运吧。而且不知道你的取材来源如何，基本上，还很不容易获得。尤其是离体时间一定要严格把握，对细胞活性的影响非常之大。希望我的经验对你有帮助。
