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标题:【求助】求助海马神经元的培养基配方

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发表于 2012-11-6 16:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】求助海马神经元的培养基配方


请问列位谁知道海马神经元的培养基配方？十分感谢！
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2012-11-6 16:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

先将海马神经元用含血清的培养液接种，待神经元黏附于底物后再换成不含血清的培养液。接种用的培养液由含600mg/ml 葡萄糖的MEM加10％马血清组成，培养液中还需补充下列成分：终浓度为100ug/ml 的转铁蛋白、5ug/ml胰岛素、20 nmol孕酮、100umol/L腐胺、30nmol/L二氧化硒。此外，有时还需添加1mmol/L丙酮酸钠和0.1％卵白蛋白。这些补充成分的贮存液应置于 -20℃保存，胰岛素贮存液应溶解于0.01NHCL中。
不知对你有没有用。
最好直接在将海马细胞接种于多聚赖氨酸处理的盖玻片上，便于用显微镜观察。
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发表于 2012-11-6 16:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
十分感谢，但是我们科室是：基础培养基：DMEM/F12 血清：胎牛血清
加双抗：青，链霉素 。 我想问一下它们各自的比例！
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2012-11-6 16:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

DMEM:F12 1:1
胎牛血清　10%
青，链霉素终浓度各100U/ml

接种后要加阿糖胞苷。
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发表于 2012-11-6 16:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我是用的Gibico的Neurobasal A+,需加B27和Glu，无血清培养，文献报道胶质细胞生长仅为1%，因此可不用阿糖胞苷进行细胞纯化。但是我现在还在摸索阶段，最近一次采用的是加5%血清培养，再加阿糖胞苷纯化。下次准备采用无血清培养。
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发表于 2012-11-6 16:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教各位大侠：
海马神经元培养时，终止胰酶消化使用ＢＳＳ好还是用含血清的培养液好？（配方？）
消化好后接种培养液用？好，配方如何？
细胞贴壁后一定要用无血清培养液吗（如Ｂ２７），如果没有可用？代替？
我看了一些资料都不太一样，我目前有：ＤＭＥＭ／Ｆ１２．胎牛血清．马血清，能否充分利用目前资源？
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发表于 2012-11-6 16:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们是用D-hanks终止消化的，细胞贴壁后不一定要用无血清培养基，如果你做缺氧，有文献报道是可以用无血清培养基的，缺氧效果好！以你现有的这些可以依照everever大侠的配方啊！
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发表于 2012-11-6 16:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们实验室海马神经元的培养较成熟，大体如下0.125％胰蛋白酶的磷酸缓冲液中消化30分钟（37℃），用含血清的种植液终止消化。种植液的配方为高糖DMEM 78%,胎牛血清 10％，马血清10％，谷氨酰胺储备液1％，青链霉素储备液1％。24小时后换为培养液进行培养，培养液配方DMEM 86%，马血清10％，N2 1％，B27 2％，谷氨酰胺储备液1％，青链霉素储备液1％。24小时后加阿糖胞苷3ul/ml，作用48小时后全量换液，以后每周半量换液。这种方法的细胞非常多，状态也很好，无血清的培养方法状态不及此，象膜片钳这种对细胞要求很高的实验，最好不要用无血清培养的方法。
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发表于 2012-11-6 16:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我所在的实验室也在做海马神经原的培养,目的也是用于膜片钳,我也是刚刚开始接触海马细胞,养了几次发现背景很脏,而且正如你所说的膜片钳对于细胞形态的要求比较的高,我用的是无血清的培养方法,使用的是24小时内的新生大鼠,细胞经0.125%终浓度的胰酶消化20分钟,吹打,离心200g 10分钟,200目过筛,静置2小时加DMEM80%+10%马血清+10%胎牛血清的种植液,24小时后换无血清培养液.但细胞形态一直不好,我听一位在国外实验室专门培养海马的老师说17天胎龄的老鼠最适合,超过这个时期的老鼠一般培养出来的就是胶质细胞,B27可以抑制胶质细胞的生长达到纯化海马神经原的作用,你所用的阿糖胞苷是不是也是这个作用啊,我刚刚开始做实验还需要你的多多指教,还有我现在的细胞细胞膜很薄,封接后吸破后细胞很快就散了,可以向您请教以下你们实验室的具体做法吗?谢谢!!
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发表于 2012-11-6 17:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我现在用的就是neuronbasal＋B 27培养基。是不是就不需要添加胶质细胞抑制剂了？求教楼上各位关于B27可以抑制胶质细胞的文献？我现在培养的是新生的小鼠是不是胶质细胞就会多些，还要抑制吗？
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