细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】有这么一回事吗

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 16  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】有这么一回事吗

北风那个吹[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79353
精华 0
积分 232
帖子 162
信誉分 101
可用分 1561
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
1

发表于 2012-11-6 17:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】有这么一回事吗


最近细胞爬片做的好不爽，听说可以直接把细胞接种在培养板里然后固定染色，这样得到的细胞爬片比较均匀而且不容易掉片，有谁作过，能谈谈经验吗？
顶部
XYZQ[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74654
精华 0
积分 533
帖子 725
信誉分 100
可用分 4481
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-13
状态 离线
2

发表于 2012-11-6 17:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以啊，我就做过，不过得用多聚甲醛固定，我做的是荧光的免疫组化，比较事，最后在倒置荧光显微镜下观察。
普通的非荧光免疫组化，理论上也是可以做的，但是你得保证以后你观察，照相是否方便啊，是吧？
顶部
windy+++[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74130
精华 0
积分 490
帖子 720
信誉分 100
可用分 4343
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-6
状态 离线
3

发表于 2012-11-6 17:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

为什么照相不方便？不是一样的吗？我想不出．我担心的是到时候染色用的抗体比较多，就是９６孔板，一孔也得１００微升的抗体吧，很费，你认为是这样么？
顶部
greenbee[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79370
精华 0
积分 710
帖子 1119
信誉分 100
可用分 6368
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
4

发表于 2012-11-6 17:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你好！
我想做荧光的免疫组化，监定平滑肌细胞，不知如何做。pbs洗3次，多聚甲醛固定[24孔中加多少啊？],
0.3trition30分钟
加1抗，[不用湿盒，如何防干燥？用个大饭盒，加上水，盖上盖，过夜？]
pbs洗3次
加2抗
封片[如何做？]
镜检
请你指点
在下先叩谢了
顶部
乌贼老弟[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74586
精华 0
积分 336
帖子 411
信誉分 100
可用分 2791
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
5

发表于 2012-11-6 17:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
多聚甲醛固定[24孔中加多少啊？],

——————————

0.5-1.0 ml;
顶部
乌贼老弟[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74586
精华 0
积分 336
帖子 411
信誉分 100
可用分 2791
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
6

发表于 2012-11-6 17:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
加1抗，[不用湿盒，如何防干燥？用个大饭盒，加上水，盖上盖，过夜？]

_____________________________________________________________________________

parafilm覆盖，或将coverslips倒扣在载玻片上后照你的方法，另外饭盒里可以放上纱布；
顶部
乌贼老弟[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74586
精华 0
积分 336
帖子 411
信誉分 100
可用分 2791
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
7

发表于 2012-11-6 17:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
封片[如何做？]

——————————————————————————————————————————————

如果立即观察、拍照，可以用PBS封片，若放置一定时间则请用水溶性封固剂封片并置4度保存。
顶部
zhenxin[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76024
精华 0
积分 748
帖子 1216
信誉分 100
可用分 6848
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-31
状态 离线
8

发表于 2012-11-6 17:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那样，你得用倒置显微镜才能照相啊，否则就没法照的，你的摄像头得接到倒置显微镜上。呵呵！是不是，再想想！当然，如果你们都有，那没有任何问题。我现在一般都不用玻璃爬片，因为可以用倒置荧光显微镜，呵呵！
如果你想把塑料板剪下来，恐怕是很难的。
顶部
greenbee[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79370
精华 0
积分 710
帖子 1119
信誉分 100
可用分 6368
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
9

发表于 2012-11-6 17:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢2位高手的指点，在下再次叩谢了
饭盒里可以放上纱布，是什么目的？
parafilm覆盖，必须吗？
PBS封片，是滴上1滴pbs,盖上盖？听说有人用干油封的
有倒置荧光显微镜的话，就可以不要爬片了？不然只有爬片了？
顶部
乌贼老弟[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74586
精华 0
积分 336
帖子 411
信誉分 100
可用分 2791
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
10

发表于 2012-11-6 17:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
放上纱布，可吸水，不易干掉，这样水可以少放点，另外拿饭盒时也用不着很小心哦（开玩笑）；

parafilm或coverslips起的作用：可以减少抗体用量（穷啊，没办法），还可以减小撒开来的概率；

封片用PBS，还是甘油，即刻观察、拍照情况下无所谓的，至于量吗，尽量少就是了，但前提是封好片别出现气泡哦（要练的）。
顶部
 16  1/2 12››