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标题:【求助】明胶包备，出现奇怪的东西

abc816[使用道具]
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发表于 2012-11-6 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】明胶包备，出现奇怪的东西


我用0.1g的明胶溶于100ml三蒸水里。融解后用高压消毒。在铺到培养瓶里。室温下2－3小时。再放入培养箱里过夜，倒掉多余的。就个接种了。
我的步骤有错吗？还有我再相差明微镜下看到许都颗粒，一个一个的排满了培养瓶的底。这是什么原因呢。
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2012-11-6 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以用PBS冲洗一遍后，再用含血清(10%)的培养液1ml冲洗一遍。
你说那些颗粒是明胶颗粒，没有关系的。最好还是按上述步骤冲洗一下。
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vivian4123[使用道具]
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发表于 2012-11-6 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

粗制的明胶中会混杂有不少细微的杂质，我认为你在显微镜下所观察到的颗粒也有可能就是这些物质。我们实验室在高压消毒前通常会将配好的明胶溶液先行滤过一下。并且，明胶铺板后室温放置30分钟后即可将多余的吸弃，不必放入培养箱里过夜。
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duoduo[使用道具]
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发表于 2012-11-6 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
粗制的明胶中会混杂有不少细微的杂质，我认为你在显微镜下所观察到的颗粒也有可能就是这些物质。我们实验室在高压消毒前通常会将配好的明胶溶液先行滤过一下。并且，明胶铺板后室温放置30分钟后即可将多余的吸弃，不必放入培养箱里过夜。

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好像不是太好过滤吧，因为明胶本身就不是很好溶解的，高压后才溶解。除非是那种可溶性的明胶，我倒是用过，小瓶装的。
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abc816[使用道具]
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发表于 2012-11-6 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

包备好后，应该怎么保存？
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www.1[使用道具]
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发表于 2012-11-6 17:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
现用现包吧！
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2012-11-6 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

明胶在室温下的确难溶，可以将其置于50-60度水浴中助溶，随后立即正压过滤。明胶包被好后如果不马上使用,可以盖紧瓶口放入无菌饭盒内4度冰箱短期存放，用时PBS冲洗一下。还有，如果zbch 是在培养ESc，我建议你将明胶浓度该为２％。０．１％的明胶由于浓度低，对克隆的支持力较差，不能形成较大的克隆，并且ESc也容易发生分化。
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abc816[使用道具]
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发表于 2012-11-6 17:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
多谢回复。我是在作ESC细胞。明胶的作用是起到使细胞更易贴壁的作用吗？铺了后，能用什么方法检测的确是铺了呢?
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2012-11-6 17:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

问： 明胶的作用是起到使细胞更易贴壁的作用吗？

答：也可以这样说，明胶可以支持ESC成克隆性生长。

问： 铺了后，能用什么方法检测的确是铺了呢?

答：不需要做任何检测，残留在瓶壁上的明胶就已经足够了
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