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标题:【讨论帖】吸光度值A可以是大于1的吗?

cocacola[使用道具]
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【讨论帖】吸光度值A可以是大于1的吗?


我最近作了MTT,随毒性药物的作用,吸光度逐渐降低,我很高兴。
本以为行了,可是,在查文献是却发现,很多文献报的各组吸光度值A都是小于1的,而我的除了空白对照是小于1以外(0.05),其余都是大于1的,在2.7--1.3之间,我的操作没有问题啊,而且重复2遍实验都是这样,波长是570nm。
我的结果怎么样?吸光度是怎么算的?A值从理论上讲,可以大于1么?
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一叶[使用道具]
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可以大于1的,供参考。
cuturl('http://www.cbio21.com/ky/meibiaoyi/ascent.htm')
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/thread/1065941')

数值在在2.7--1.3之间,可能你的细胞数接种得比较多吧?
太大的话不在线性范围,误差较大。一般线性范围为0.2-0.7的。
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utt0989[使用道具]
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是不是细胞量接种多了,重新做一次麻烦吗?
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zhenxin[使用道具]
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我也有问题要问,我是以每孔10000个细胞接种的,实验结果出来后,吸光度值都在0.02~0.07之间,可是很多文献都每孔4000个细胞接种,吸光度值却都接近1,我重复了n遍,吸光度值从没超过0.1,这是怎么回事?
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不同种类的细胞表达的琥珀酸脱氢酶是不同的,并且增殖速度是不一样的,你的细胞可能增殖比较慢,实验这几天没有怎么长,所以应该把细胞密度再传高一些,是原代细胞吧?一般来书增殖都很慢的,所以你估计得提高一倍左右的细胞。不能完全按照书本操作的!
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zhenxin[使用道具]
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相关疾病:
肿瘤
我养的是肿瘤细胞,是买的细胞株,我在进行药物干预时根据文献上的方法先用无血清进行同步化,然后加药,配药时仍用无血清培养基,是不是跟细胞在无血清环境中不能增殖有关,96孔板可获细胞数大概是10的5次方,考虑到我的细胞在实验过程中只会凋亡,基本不增殖,我可不可以,以10的5次方个细胞进行接种,因为我已经接种到10000个了,吸光度值还这么低,我若继续以10000个接种,测出的吸光度值这么低有意义吗?能否用这个作为最后的实验结果?
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zhenxin[使用道具]
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还有有是吸光度测出来是负值这又是怎么回事,请赐教,谢谢!
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一叶[使用道具]
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我养的是肿瘤细胞,是买的细胞株,我在进行药物干预时根据文献上的方法先用无血清进行同步化,然后加药,配药时仍用无血清培养基,是不是跟细胞在无血清环境中不能增殖有关,96孔板可获细胞数大概是10的5次方,考虑到我的细胞在实验过程中只会凋亡,基本不增殖,我可不可以,以10的5次方个细胞进行接种,因为我已经接种到10000个了,吸光度值还这么低,我若继续以10000个接种,测出的吸光度值这么低有意义吗?能否用这个作为最后的实验结果?

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“96孔板可获细胞数大概是10的5次方”,那是针对Hela细胞而言,咱们一般的细胞的大小比Hela细胞大,所以估计减半吧。大概是5X10的四次方左右吧。
考虑你的肿瘤细胞不增殖,你可以接种10000-50000之间的细胞数。另外,不知道你最后做MTT孵育的时候是否用含血清的培养基,理论上孵育时的应该用含有2-8%左右血清的培养液孵育,有利于细胞吞噬MTT并将其转化(有文献专门报道过,具体原理记不清楚了)。
至于你最后得出负值,是不是你的本底孔没有做好,或者不干净?你再查查原因吧。
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zhenxin[使用道具]
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那我在进行药物干预时应该用无血清培养基还是含血清培养基
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star#room[使用道具]
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与你非药物干涉时的条件要相同呀,要不哪里来的可比性!
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