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标题:【求助】细胞爬片不顺

bamboo16[使用道具]
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1
 

【求助】细胞爬片不顺

我从河南郑州玻璃仪器厂买的13mm的圆形载玻片,泡酸24h,水洗,多聚赖氨酸中泡1下,想自然凉干,等了好几天,就是不愿干,放在培养皿中,包以白布,高压15磅,20分,用时见片与片粘在1块的很多,很难操作。
细胞也似乎很不愿爬,浮着的很多。
有1次,48h细胞爬的很多,4%多聚固定后,细胞脱下来99%!苦啊!
请高手指点!
thank you
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vvmmoy[使用道具]
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2
 
13mm的圆形载玻片

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应该是盖玻片吧。
片与片间粘在一起的话,爬片肯定不好,可以分开来后消毒的;
PFA固定时细胞状态好吗?还有就是会不会是被冲走了?
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49888[使用道具]
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用细胞爬片本版搜索,资源无数。相信可以解决你的问题。
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BOSS2011[使用道具]
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你应该把残留的多聚赖氨酸洗净
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mimili_901[使用道具]
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玻片的处理很重要,我一般是玻片在泡酸水洗后,再浸泡在无水乙醇中,用镊子夹取玻片在酒精灯上过火,然后在消毒,使用时玻片贴在一起也没有影响。另外,你的细胞是贴壁的还是不贴壁的,如果是贴壁细胞的话,玻片不需要多聚赖氨酸处理,如果是不贴壁的一定要用PBS清洗多聚赖氨酸。
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bamboo16[使用道具]
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6
 
你应该把残留的多聚赖氨酸洗净

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不明白,请解释1下,谢了
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bamboo16[使用道具]
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玻片的处理很重要,,再浸泡在无水乙醇中,用镊子夹取玻片在酒精灯上过火,如果是贴壁细胞的话,玻片不需要多聚赖氨酸处理

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泡在无水乙醇中,什么目的?贴壁细胞的话,玻片不需要多聚赖氨酸处理。行吗?
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xueyouzhang[使用道具]
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你好!
用于细胞爬片的盖玻片的处理过程虽然很烦琐,但是非常重要。我做的原代培养细胞爬得很好。互相学习吧。我的处理如下:
1 泡酸时要一张一张的分开,防止其粘在一起达不到目的。 24h
2 冲洗时仍要一张一张的冲洗,彻底冲干净。先用自来水15遍,再用去离
子水和双蒸水。
3 敞口在高温烤箱里烤干(注意最好将每张盖玻片都分开放,以免在烤干
过程中粘在一起。(我最初也是总粘在一起)
4 然后,装在培养皿里,一并置于饭盒中,高温消毒。
5 直接使用,一般不需再处理。有人喜欢于置在培养板之前用火焰烧,
时间稍长,很容易在盖玻片上留有黑色的对细胞有毒的物质。我也是有
这方面的教训的。祝你试验顺利!
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taoshengyijiu[使用道具]
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9
 
我在24乘24的盖玻片上爬过血管平滑肌细胞,现在把方法介绍一下,希望对你能有帮助:
1、24乘24的盖玻片的对角线恰好是35mm,所以可以不必裁切,正好放到35mm的培养皿里面而不晃动,爬满后可以用镊子轻轻取出,也比较方便,如果切成15乘15大小,可以放到12孔板里爬。
2、盖片泡酸清洗如md518880 所说的,最好一张一张的洗,应该强调一点是,我在烘干的时候,把洗净的片子倾斜靠在玻璃平皿的内侧壁上,这样清洗时残留的水滴可以流下去,保证片子的清洁。
3、片子烘干后一张一张的平铺在干净纱布上包好装入饭盒高压除菌,而后送超净台备用。
4、配制0.2%明胶,过滤除菌。将处理好的盖片置入培养皿或培养板孔中,以吸管吸取明胶溶液2~3ml分别加入个皿或孔中,使其在盖片上涂匀再吸出,这样在盖片上就留下了一薄层明胶,有益于细胞帖壁。将涂好明胶的置于皿底/孔底的片子在超净台上紫外灯下照30分钟左右(敞口,不必盖盖子),明胶干后就可以往上面传细胞了。
以上是一点个人经验希望对你有帮助。
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831226[使用道具]
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看了各位上面的贴子,还是没有搞懂贴壁细胞爬片时到底需不需要用多聚赖氨酸处理盖玻片呢?
另外,我用的是已经多聚赖氨酸处理过的玻片,如果要清洁处理之后爬片,可否用无水乙醇浸泡,然后再高压灭菌?这样做会不会洗去多聚赖氨酸?搞不东呀
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