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标题:【分享帖】发几张我培养的脾脏来源的DCs图

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发表于 2012-11-10 13:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【分享帖】发几张我培养的脾脏来源的DCs图


发几张我培养的脾脏来源的DCs图


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 小中大

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 小中大

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发表于 2012-11-10 13:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这是淋巴系的DC吧，有髓系的吗？请教一下，你用那个公司的什么因子
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发表于 2012-11-10 13:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你测过流式吗？
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发表于 2012-11-10 13:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
细胞因子用的是重组mGM-CSF、mIL-4：购自Pero Tech EC公司（英国）。
粗提物做流式时CD86表达25％左右
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发表于 2012-11-10 13:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
好像低了点，你没测CD83,和CD1a吗？成熟的人类DC不贴壁，体积较原先大了数倍，我曾经从单核细胞中培养过DCs，有时形态象，测流式数值却不高
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发表于 2012-11-10 13:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
好像低了点，你没测CD83,和CD1a吗？成熟的人类DC不贴壁，体积较原先大了数倍，我曾经从单核细胞中培养过DCs，有时形态象，测流式数值却不高

——————————————————————————————————————————————————————

我没有测CD83,和CD1a，指标太多费用承受不起，我用的是贴壁法，文献报道纯度只能达到30－40％。谢谢参与
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发表于 2012-11-10 13:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这是淋巴系的DC吧，有髓系的吗？请教一下，你用那个公司的什么因子

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髓系DCs的制备：
健康小鼠，颈椎脱臼处死后，浸入75%的酒精中固定2-5分钟，无菌取双侧股骨和胫骨，尽可能的去掉其肌肉，用PBS液清洗后浸入70%的酒精中1分钟，PBS液清洗3遍，用剪刀剪掉股（胫）骨的两端，再用5ml的无菌空针吸取PBS 液分别从股（胫）骨的两端冲洗出骨髓细胞，直到髓腔变白为止，在300目的呢绒滤网中制成细胞悬液，在1500r/min条件下离心洗涤后去掉上清液按1:10的体积比加入37 ℃预温的红细胞裂解液，反复吹打与骨髓细胞混匀，室温，2-4 min后，加PBS液10 ml终止其反应，用PBS液洗涤3次后用RPMI 1640 完全培养液调整细胞浓度为 2 × 106/ml，接种于6孔培样板，每孔2 ml，加入细胞因子 mrGM-CSF 、mrIL-4 各20ng/ml，1 ml，隔天加细胞因子（首次浓度的一半）和培养基（吸弃30%加50%），培养7天。
重组mGM-CSF、mIL-4：购自Pero Tech EC公司（英国），用RPMI1640完全培养基配制为20ng/ml，mrIL-2购于晶美生物技术有限公司（深圳，中国）用RPMI1640完全培养基配制为200U/L，均-20℃保存。
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发表于 2012-11-10 13:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有没有做过兔子的脾脏DC 我想试试 可脾脏组织太坚固 用过胶原酶和胰酶还是不行 战友 能否指导 不胜感激
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