生物制药 » 讨论区 » 经验共享 » 【讨论帖】 Western blot问题解答专帖

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 741  1/75 12345678910›››|
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【讨论帖】 Western blot问题解答专帖

wood533[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76132
精华 0
积分 863
帖子 1385
信誉分 100
可用分 7745
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
1

发表于 2012-11-30 09:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【讨论帖】 Western blot问题解答专帖

大家有什么问题可以回复本帖提问
我会尽快给大家答复。希望大家将问题描述的尽量详细一些
顶部
qumm1985[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76908
精华 1
积分 475
帖子 546
信誉分 102
可用分 3616
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-10
状态 离线
2

发表于 2012-11-30 09:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
二抗如果特异性非常好，能不能不加BSA或奶粉呢？
顶部
okhaha[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77505
精华 0
积分 548
帖子 756
信誉分 100
可用分 4651
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
3

发表于 2012-11-30 09:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

page 电泳时很容易出现“牵手”现象，如何改进！蛋白显影以后，会出现弥散状，而非界限十分清晰的条带，（放胶片时没有移动）是何故？难道是蛋白砖模过程中扩散了！
顶部
zzzz[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74598
精华 1
积分 656
帖子 967
信誉分 102
可用分 5638
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
4

发表于 2012-11-30 09:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

问题同楼上，显影后会出现十分清晰的条带所谓的“杂带”，目的条带和内参都是这样的。谢谢~~
顶部
wood533[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76132
精华 0
积分 863
帖子 1385
信誉分 100
可用分 7745
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
5

发表于 2012-11-30 09:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 qumm1985 于 2012-11-30 09:34 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
二抗如果特异性非常好，能不能不加BSA或奶粉呢？

可以
二抗孵育时间一般孵育30min左右就可以了
但是最好还是在封闭体系中加二抗
good luck
顶部
wood533[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76132
精华 0
积分 863
帖子 1385
信誉分 100
可用分 7745
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
6

发表于 2012-11-30 09:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 okhaha 于 2012-11-30 09:35 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

page 电泳时很容易出现“牵手”现象，如何改进！蛋白显影以后，会出现弥散状，而非界限十分清晰的条带，（放胶片时没有移动）是何故？难道是蛋白砖模过程中扩散了！
...

蛋白量比较大
另外把分离胶凝固时间延长一点
顶部
wood533[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76132
精华 0
积分 863
帖子 1385
信誉分 100
可用分 7745
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
7

发表于 2012-11-30 09:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 zzzz 于 2012-11-30 09:40 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

问题同楼上，显影后会出现十分清晰的条带所谓的“杂带”，目的条带和内参都是这样的。谢谢~~

1，抗体质量不好，特异性不高
2，抗体的稀释比例不合适，要稀释一下
顶部
loli[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 71788
精华 0
积分 736
帖子 1171
信誉分 100
可用分 6650
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-31
状态 离线
8

发表于 2012-11-30 09:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
之前有一批标本准备做冰冻切片免疫组化的，后来没做！
标本处理程序，4%多聚甲醛经心灌注，取闹后置于中性缓冲福尔马林中后固定20小时，置于梯度蔗糖脱水，后入-70保存，请问这样的组织能不能做Western?
只写！
顶部
wood533[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76132
精华 0
积分 863
帖子 1385
信誉分 100
可用分 7745
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
9

发表于 2012-11-30 09:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 loli 于 2012-11-30 09:42 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
之前有一批标本准备做冰冻切片免疫组化的，后来没做！
标本处理程序，4%多聚甲醛经心灌注，取闹后置于中性缓冲福尔马林中后固定20小时，置于梯度蔗糖脱水，后入-70保存，请问这样的组织能不能做Western?
只写！ ...

没有处理过这样的样品
从WB的原理上来说应该是可以的
顶部
轰轰[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75630
精华 0
积分 235
帖子 209
信誉分 100
可用分 1866
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-26
状态 离线
10

发表于 2012-11-30 09:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我ECL显色肉眼可观察到条带。我用柯达的胶片压片2分钟，显影1分钟，却没有条带。而且整张片子都是黑的。胶片是3年前买的，有问题吗。
另外，我在Western Blotting专题看到ECL直接成像的，也听说这种方法。不知如何操作，还是要特定的成像系统？
顶部
 741  1/75 12345678910›››|