液质联用

多肽类药物分析中的问题？已困扰很久，急盼高手援助！

（1）多肽类化合物，有点类似内源性物质（改构），26肽，分子量2842，很难溶解，以前进行液相的时候先用碱性水溶解，再用酸调回PH。后液相达不到灵敏度要求，而且专属性也不好。
（2）改用质谱进行分析，仪器Aglient6410，正谱3电荷，液相进行梯度洗脱，流动相为：乙腈：水：甲酸。开始峰型较好，后发现空白和流动相进样中均有高响应峰出现。很难冲洗掉？不知道怎么可以处理掉？有时要冲洗好几个小时，甚至一天。曲线不直也是低浓度过差，而且也除不掉。
（3）分析：是否该药物吸附性如些强？或是否为针座密封垫污染，或其它接头污染？普通冲洗作用太弱，有没有其它更好的办法？另外，血样普通SPE效率很差，曾尝试过两个SPE串接前处理和不同的洗脱液均不是很理想。也试过沉淀蛋白法，有内源性杂峰，或太脏。现想沉淀蛋白后过超滤膜，请教高手这方面该怎么去做？
（4）另外有人建议先进行电泳，再切胶，洗出药物做质谱，本人认为不可行，不知大家有没有这样进行或定量，或者是有没有进行过毛细管电泳和质谱同时定量的。

摸索了很久，一直没有结果，非常着急。请大家多支援！！！

1. 多数多肽类化合物严重吸附，常导致线性不好；可事先考察容器是否吸附，尽量采用吸附小的容器，看玻璃管和EP管哪个吸附小或无吸附，选择之，如两者都有吸附，可用硅烷化试剂对玻璃管进行硅烷化，有可能减少吸附；
2. 进样针和底座常会吸附，有时比较顽固，严重干扰低点的峰形和面积，是造成线性差的主要原因，可选择有冲洗功能的液相，选择大体积和洗脱能力强的溶剂；另外，多进几针空白样，采集时间可用1～2min，低点的干扰有时会减少或消失。
3. 多数多肽类化合物代多电荷，电荷数和丰度常不稳定，可选择一些可挥发离子对试剂作为流动相，可能会稳定一些。
4.子离子的选择也比较重要，尽量选择稳定且丰度大的；质谱的各个条件要优化到较稳定的状态；
5.不管是最好SPE还是液液提取，最好考察装置本身对药物是否有吸附，如有吸附，线性可能不好，尽量避之。
6. 样品干燥复溶时，通常选择流动相，当有机相比例较小时，复溶流动相可能不能完全溶解药物，可先用有机相溶解，然后再加入水相，调到流动相的比例。
7.液相进行梯度洗脱时，时间最好长一些，特别是最后的平衡时间。
8.色谱柱有时会因多肽类化合物吸附而破坏，先再生一下，如效果不理想，更换之。

以上一点浅见，希望能有些帮助。

我认为主要原因是样品溶解性的问题，找到合适的溶液最大限度的溶解样品是最重要的。进样垫可能也是由于样品析出导致污染的。当然，也要考虑到随后的质谱检测，可否试一试碱性条件上样？是否会增大灵敏度？

根据描述，应该是在色谱柱上有残留样品。考虑用300A的蛋白柱。

谢谢大家！
分析中使用的是300A的柱子。
流动相也尝试碱性了，碱性的结果是标准品和样品第一天的几个样还可以，第二天就没有重现出来。标准品出峰了，实际血浆样品未出峰。后觉得碱性条件可能是出峰出在前沿峰，离子化受到抑制造成的。再后来改用水相加酸，使尽量多保留，有机相加铵水，使成离子状态，易洗脱。结果标准品和样品峰都没有了。现在还在尝试中。。。


请继续多提保贵意见！

[ 本帖最后由 troy.tper.lee 于 2008-3-7 13:37 编辑 ]