【分享帖】"黑胶虫"图片

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标题:【分享帖】"黑胶虫"图片

yysr238[使用道具]
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发表于 2012-12-27 19:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1、黑胶虫概况：

在细胞培养的时候，有时会在400倍显微镜下看到小黑点在动，小黑点有时呈点状，有时呈小的片状，运动形式为在原地振动（类似布朗运动），这种小黑点既不是细菌、霉菌，也不是支原体（我们曾经请周守长用血平板培养过，没有菌落出现），目前业内人士称其为“黑胶虫”。

黑胶虫到底是否为生物？这个一直是业内人士的疑惑。黑胶虫一般是存在血清里的，而血清通常是经过0.1μm滤膜过滤的,所以血清里不可能存在细菌、霉菌及支原体等微生物。如果说黑胶虫不是生物，它会不断增多，达到一定数量时会与细胞竞争性生长，与细胞竞争培养基中的营养，从而使得细胞营养不足而死亡。

不管对于黑胶虫的争论如何,但有几个是目前大家公认的：
① 与细胞竞争性生长，对细胞生长有不利影响。
② “黑胶虫”会增殖，增殖多时，视野下一大片都为“黑胶虫”。
③ “黑胶虫”与血清有关，与血清质量有很大关系。

上传几张PP给战友们共享一下:

附件

2012-12-27 19:26

92956499.jpg (52.78 KB)

yysr238[使用道具]
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发表于 2012-12-27 19:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

2、目前对“黑胶虫”的定论：有2种解释：

第一，黑胶虫为生物。它是小于细菌的生物，直径小于0.1μm，大多国外血清中多见，可能是国外牛血清中含有的某种原虫。只要它是生物，那么在培养基中一定会对细胞有影响。

第二，黑胶虫不是生物。国内的血清中，通常灭活之后都会有絮状沉淀出现，而黑胶虫出现时，所使用的血清被反复冻融过多次。所以推测，所谓的“黑胶虫”其实就是血清中的某些蛋白成分的物质，经过灭活之后丧失活性，在培养基中，镜检见到的运动其实是这些物质在溶液中做“布朗运动”。随着细胞消耗培养基，这些物质越来越多，最后细胞所用的营养消耗完，细胞容易死亡。

PS:第二张PP:圈中的小黑点即为所谓的"黑胶虫"

附件

2012-12-27 19:26

84980809.snap.jpg (23.05 KB)

yysr238[使用道具]
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发表于 2012-12-27 19:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

3、对于“黑胶虫”的处理方法：

首先，血清买回来灭活前冻融应逐级冻融，即按照-20℃——4℃完全融化后，再置入水浴中，与室温一起升高到56度，这样的目的是避免温度骤变，导致血清中的营养物质丧失活性。

第二，血清灭活后分装保存。按照每次用血清的量分装，尽量减少血清冻融的次数。分装时注意无菌。

第三，细胞培养时血清浓度稍大一些。通常细胞培养血清浓度为10%-15%，但如果血清冻融次数过多，那营养物质丧失活性，按15%的浓度配制事实上达不到15%的营养成分，故培养基配置时一般用18%-20%的血清。

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发表于 2012-12-27 19:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

PS:1、以上图片均为原创.
2、细胞培养时常常会出现意想不到的情况,想与各位战友一起分享一下. 其他战友有什么好的经验与资料，也请一起上来共享：）

831226[使用道具]
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发表于 2012-12-27 19:30 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果是小于细菌的生物，那么在那么低的物镜下肯定是看不见的。

yysr238[使用道具]
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发表于 2012-12-27 19:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

是这样,所以这正是"黑胶虫"的争议所在.

===========================================================================================================

其实在显微镜下放大到400倍仔细看,发现这些小黑点其实是一些黑色的类似碎片的东西聚集在一起,在溶液中做布郎运动.个人认为它也不是一种生物,我们曾将这种"黑胶虫"污染的培养基划了血平板,结果什么都没有长出来。所以，这也可以说明所谓的“黑胶虫”是生物的可能性比较小。

铜雀[使用道具]
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发表于 2012-12-27 19:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

好象看到过,开始觉得是细胞碎片!
是不是贴在壁上的?

831226[使用道具]
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发表于 2012-12-27 19:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢分享，请问，假如我们的冻存细胞株已经污染了“黑胶虫”。是否需要重新引进细胞株？

dongdongqiang[使用道具]
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发表于 2012-12-27 19:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

应该也不是细胞碎片。
原因如下：
用刚开启的血清配置1640完全培养基，起初做不会有黑胶虫，但是培养基在4度放置1周甚至更长时间后拿出来，直接取出2ml在24孔板培养，同时用来培养细胞，3天后均能发现黑胶虫，只是培养细胞的里面更多一些，所以比较同意“第二，黑胶虫不是生物。国内的血清中，通常灭活之后都会有絮状沉淀出现，而黑胶虫出现时，所使用的血清被反复冻融过多次。所以推测，所谓的“黑胶虫”其实就是血清中的某些蛋白成分的物质，经过灭活之后丧失活性，在培养基中，镜检见到的运动其实是这些物质在溶液中做“布朗运动”。随着细胞消耗培养基，这些物质越来越多，最后细胞所用的营养消耗完，细胞容易死亡。”这种说法

nut6694[使用道具]
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发表于 2012-12-27 19:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我对这个“小黑”略有感触^_^。。。。
最初接触它是在05年末的时候，曾经连续两周观察它的生长情况，同时检查各类所涉及的试剂，并使用各种方法对它进行“消灭”，历经一个月又余，未果。。汗一下n@_@n，，所以，各位战友，如果实验时间比较紧的时候就换细胞做啦！有多余时间就找找方法。。HOHO～
我猜测它应该是种生物，而且始发并非来是直接来源于血清，可能其存在与细胞本身也有一定关系。根据镜下观察，它其实也并非是做“布朗运动”，如果观察细致些，还可见某些小黑穿透细胞壁，当然是在细胞状态不好及死亡后。

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