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标题:【求助】荧光显微镜观察GFP

xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2012-12-29 10:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】荧光显微镜观察GFP


最近再做慢病毒相关实验，用荧光显微镜观察转染GFP的细胞，感觉拍照效果很不好，晚上看的GFP的图片的背景都是黑色的，这样看起来GFP就特别突出，但是我的背景就是有绿色，这方面我是新手，又没有其他老师教，所以想请教下大家，是不是我倒置荧光显微镜设置错了，还是有其他原因，希望有这方面经验的高手能挤出点你们宝贵的时间帮帮我，万分感谢！这是我的图片


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2012-12-29 10:32
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qhyu[使用道具]
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发表于 2012-12-29 10:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没做过这个实验，不过，从这张图上看，你的染料染出来是绿色荧光吧？
背景的绿色应该是染料的散射光或者这个波段细胞本身有绿色光。
如果是散射光，可以用降低曝光强度和稀释染料来调节；如果细胞有荧光，就要用背景消除剂。
建议你先降低一下曝光强度，再试一下稀释染料看看。
还有种方法就是强制调黑平衡（不知道你的软件有这个功能没有，就是把你认为是黑的地方用黑色显示），不过这种方法会改变某些细节，如果要对图片进行后续分析的话可能会造成偏差。
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发表于 2012-12-29 10:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

调一下曝光时间和对比度。普通的ADsee就可以编辑~~试试吧。注：我不是托啊
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发表于 2012-12-29 10:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

荧光照片调曝光强度和通常说的调曝光时间和对比度是不一样的。
比如LZ的照片减小了曝光强度之后现在看来比较浅的那些绿色就会看不见，显示为黑色。而用图片编辑软件处理后那些地方还是绿的，起不到作用。
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发表于 2012-12-29 10:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

把白光全部关掉，只用蓝光激发试一试
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xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2012-12-29 10:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 ladyhuahua 于 2012-12-29 10:33 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

把白光全部关掉，只用蓝光激发试一试

我看荧光的时候是用盖子把上面挡住，这样白光不是被遮住了么
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发表于 2012-12-29 10:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉得楼主这个背景光的强度好像太强了吧 如果激发光足够强的话 假阳性的可能性会大大增加 我做的GFP的阳性细胞会非常强 但背景是几乎全黑的 我这边一张我自己做的图片 给你做个参考吧


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发表于 2012-12-29 10:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
LS战友的照片拍得就很好。

拍荧光的时候光源只开荧光的就可以了。如果怕对焦调不到位置可以先开普通光源找到位置，然后关了再打开荧光光路。
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