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标题:【求助】关于流失测细胞凋亡和周期的几个问题!

wawa[使用道具]
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【求助】关于流失测细胞凋亡和周期的几个问题!


1,测凋亡时,选择Annexin-V-PI试剂盒,为什么做出来的凋亡图像全部是红色的点,而没有绿色荧光呢?
2,测量凋亡的同时也检测了细胞周期,那么凋亡检测中的凋亡率和周期检测中的凋亡率为什么不一致呢?
3,大多数的文献中都提到:十字门左下是活细胞,左上是死亡细胞,右上是晚期凋亡细胞,右下是早期凋亡细胞,为什么版主的解释好像有出入阿,很多人对左上象限的解释不一致阿?
4,测量细胞周期是,Diploid:100%,但是G1,S,G2的比例,我举个例子:G1:65.27% at 53.13;G2:16.45% at 99.55,at后面这个是什么意思?而且G1/G2好像不是简单的两者的比例阿?好比上面这个结果G1/G2: 1.87,他们的比值结果完全不是1.87阿?
5. 周期图中的凋亡率是不是右边两个象限的比率之和阿?

小弟确实是新手,而且很多东西可能会者不难,难者不会吧,还请版主和各位高手指教。
我贴一张图,请各位指教,谢谢了。


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2013-1-5 15:51
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1,测凋亡时,选择Annexin-V-PI试剂盒,为什么做出来的凋亡图像全部是红色的点,而没有绿色荧光呢?

================

用什么看的?
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园丁##[使用道具]
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测量凋亡的同时也检测了细胞周期,那么凋亡检测中的凋亡率和周期检测中的凋亡率为什么不一致呢?

===================================

原理不同,各种方法检测的结果都不同。
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园丁##[使用道具]
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多数的文献中都提到:十字门左下是活细胞,左上是死亡细胞,右上是晚期凋亡细胞,右下是早期凋亡细胞,为什么版主的解释好像有出入阿,很多人对左上象限的解释不一致阿?

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个人认为这个问题在很多文献以及公司的网站解释都不多说。但是,不考虑它也行,因为正常情况下,左上本来就很少。欢迎大家讨论!
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园丁##[使用道具]
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测量细胞周期是,Diploid:100%,但是G1,S,G2的比例,我举个例子:G1:65.27% at 53.13;G2:16.45% at 99.55,at后面这个是什么意思?而且G1/G2好像不是简单的两者的比例阿?好比上面这个结果G1/G2: 1.87,他们的比值结果完全不是1.87阿?

======================================

at后面是荧光道数。99.95/53.13=G2/G1
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周期图中的凋亡率是不是右边两个象限的比率之和阿?

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Annexin V-PI法不能测周期,如果您的这个直方图来自该法,则无意义。
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qiangren789[使用道具]
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试补充下第一问题:
1,测凋亡时,选择Annexin-V-PI试剂盒,为什么做出来的凋亡图像全部是红色的点,而没有绿色荧光呢?

流式图中的点是检测器捕获的一个信号点,其颜色并不代表实际的荧光颜色!流式图中的点是分析者人为指定的!

另外,楼主图中样品CV太高了!数据可信度不高!
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wawa[使用道具]
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对不起,可能我不够认真,我改正几点:
1.对不起, 我本来是想说凋亡图中的凋亡率是不是就是十字门中右边两个象限的比率之和?
2.如果at后面是荧光道数,那前面是不是就是细胞的数目/还是有别的意思?
如果是这样的话,用荧光道数计算出的G2/G1和用细胞比例计算出的G2/G1有什么不同呢?
3.测凋亡时,选择Annexin-V-PI试剂盒,为什么做出来的凋亡图像全部是红色的点,而没有绿色荧光呢?版主问我:用什么看的?因为是实验室的老师帮忙给做的,我也搞得不是很清楚,但是看到有同学用同样的试剂盒做出来的是绿色荧光,所以我才这样问,如果版主有时间,能不能说一下产生荧光颜色不同的原理吗?
4. 版主能不能用一句话总结一下流式测凋亡和测周期原理差异在什么地方呢?
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wawa[使用道具]
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另外周期图中的APOTOSISI%就是细胞凋亡站的比率,那是不是也能反映细胞凋亡情况呢,还是本身就不考虑这个值得意义呢
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那请您看看这张图(1-4分别是不同浓度药物诱导凋亡组),答辩的时候师兄说这是Annexin-V-PI试剂盒染色测得凋亡,四个象限,分别是左下是活细胞,右下是早期凋亡细胞,右上是晚期凋亡,左上是死亡细胞。
按照楼上师兄的观点,这种红色应该是PI的颜色,那么应该全部都是晚期调亡细胞和死细胞,怎么会有活细胞呢?
谢谢分析,获益很多,建议斑竹给予加分


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