细胞世界

只是我用sigma公司FITC标记的鬼笔环肽染的SH-SY5Y细胞，用激光共聚焦显微镜观察，为什么看不到一丝丝的微丝呢，而是整个细胞都着色？
以下是我的实验步骤：
1.将细胞PBS漂洗2次，每次5min；
2.室温下以PBS配置的3.7%多聚甲醛固定30min；PBS漂洗3次，每次5min；
3.0.1%TritonX-100处理3次，每次5min；PBS漂洗3次，每次5min；
4.50mg/L(PBS稀释)FITC-鬼笔环肽室温下染色40min，PBS清洗2遍（避光操作）
5.荧光显微镜观察

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你好，我遇到了跟你一样的实验问题：用sigma的phalloidin染F-actin，没有丝状物出现。
请问你现在染出来了没有？怎么解决的？

只是我用sigma公司FITC标记的鬼笔环肽染的SH-SY5Y细胞，用激光共聚焦显微镜观察，为什么看不到一丝丝的微丝呢，而是整个细胞都着色？
以下是我的实验步骤：
1.将细胞PBS漂洗2次，每次5min；
2.室温下以PBS配置的3.7%多聚甲醛固定30min；PBS漂洗3次，每次5min；
3.0.1%TritonX-100处理3次，每次5min；PBS漂洗3次，每次5min；
4.50mg/L(PBS稀释)FITC-鬼笔环肽室温下染色40min，PBS清洗2遍（避光操作）
5.荧光显微镜观察

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我们也是用sigma公司的phalloidin，但是做了3次，都没有做出应力纤维，也是整个胞浆都着色，你的问题有没有解决呀？你们是按照说明书做的吗？

我也是用sigma公司的FITC-phalloidin，做了几次次，也没有出现丝状结构，整个胞浆都着色，多为点状染色，不知大家结果现在怎么样，还请指教。

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我们应该买的是同一个货号的，P5282，那个说明书上说用50ug/ml，但我们试了5ug/ml，感觉和50的差不多，染色前用1%BSA封闭了20min，单独染actin时做出来了一次，但和其他蛋白一起染时就出不来了，一直在找各种可能的原因，不知道你们是什么流程，可不可写出来交流一下。