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标题:【求助】大鼠血管平滑肌细胞的培养

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【求助】大鼠血管平滑肌细胞的培养

本人去年12月份开始尝试着做大鼠血管平滑肌细胞的原代培养,到今天一共做了6次,其中仅有1月份一次组织块爬出了细胞。每次都是按照文献中说的步骤进行操作。10%FBS,DEME/F12(都是Gibco),现在想到做原代都有种想吐的感觉,不是不想做,每次做了都没有结果!
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bs4665[使用道具]
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这是我1月中的一次,唯一一次有细胞爬出来的!


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再来一张


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但后面又做了两次,现在均没有什么动静,真心着急啊!
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大鼠血管平滑肌细胞的原代培养刚开始可能有些难度,慢慢培养起来就比较容易了,我养了五六年的VSMCs,觉得有以下几点你可能没有注意到:
1. 取血管的速度要快一些,不要磨磨蹭蹭,尽快取下来放到培养基中。
2.血管用剪刀剪的不要太小,速度也要快一些。
3.把组织块在培养瓶中铺块时无需太均匀,加快速度。
4.翻瓶不要太早也不要太晚,4个小时比较合适。
5.开始3-5天不要去看,防止晃动瓶子对细胞爬出不利。6-7天换液时再看。
总之,贴细胞的时候速度要快,但要细致。祝好运!
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拜服啊!你说的那几点在以后的实验中我会注意,希望早点能够养出来!

总之,要谢谢你啊!以后希望多多请教您呢!
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你好,大鼠血管平滑肌细胞我们公司技术部做过,我只知道一些简单的操作,具体的流程还得请教我们技术人员,下面是我个人的一点小建议,希望能够帮得上忙哦!
1 剪的组织块要小一点,尽量要有多角形,以便细胞爬出来;
2 操作过程中要避免过分牵拉血管;
3 所用的大鼠不要太大,150g左右
4 把组织块贴入瓶子中时,可以沾点百分之二十的胎牛血清,那样更容易铺平

培养用的组织(如胸主动脉)从体内取出来后,直接置入DMEM的血清瓶中(注意:瓶中的DMEM的量能漫过组织就可),在血清瓶中中经过一般的清洗,把血管外表的血丝洗一洗就可,然后 取出来含有D-Hanks液的平皿中,去除血管外表纤维组织,刮除内膜,稍微将平滑肌组织带有的水份用眼科镊刮除后,移入青霉素瓶中,滴入1-2滴的胎牛血清,然后用剪刀剪,一般剪100下,大概就是我们需要的组织大小了。铺瓶,加培养基,至于多少时间转正瓶子,主要还是看你铺瓶时候组织的湿度了。

我们齐氏生物是专门自己培养原代细胞的公司,现在到5月底我们正在清库存,这个是丁香通上面发布信息的网址,cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/topic/22895964') 如果有需要,或者要咨询问题的话,欢迎哦!
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有没有人用酶消化法提取大鼠血管平滑肌细胞啊?最近细胞总养不好,刚从组织块中提取出来的原代细胞就存在老化的现象,哪位高人能指点一下。谢谢!
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bs4665[使用道具]
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我还在想试一下用酶消化法做一次呢,组织贴块都做的很焦心呢!
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