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标题:【求助】流式问题CD8细胞

bongte[使用道具]
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【求助】流式问题CD8细胞

我做的正常人外周血的CD3/CD4/CD8的流式测定,没有加其他的任何阻断剂等等之类的试剂。结果中有个图,从图中,看到CD8+分为CD3+CD8+和CD3-CD8+,这个正常吗?图片请看附件。求助各位高手,给个解答啊?另外还想问个问题,平时免疫书上说的正常人的CD4/CD8的比值为1.4-2,这个指的是CD3+CD4+/CD3+CD8+吗?因为我这个图上CD3-CD8+比例还很高?
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biabiade[使用道具]
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正常啊!T细胞表面有很多CD分子的表达,所以书上指的不是你说的,CD3分子是参与T细胞的活化信号传导的,根据您的结果,是否想看到参与免疫应答的T细胞的情况,也就是是发生活化了的T细胞的比例!
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831226[使用道具]
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CD3-CD8+的细胞自然不是T细胞了。
你如果要检测T细胞,首先在FSC-SSC图中就应该设门淋巴细胞,将单核细胞去除,因为单核细胞有部分就是CD8阳性的,所以你的这个CD3-CD8+的细胞应该就是单核细胞。
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star#room[使用道具]
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FSC-SSC设门其实是有问题的,在单核细胞很多的时候,很容易导致CD3/4/8测定不准确,因此临床上现在都不建议单独使用这种设门方式,可以结合CD45/14来设门,或者干脆就选择用含CD45的试剂,用SSC-CD45设门。

如果对结果不肯定的话就,就把上边的结果再和CD45设门的结果对比一下,如果差异太大,说明有单核细胞干扰。
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831226[使用道具]
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FSC-SSC设门其实是有问题的,在单核细胞很多的时候,很容易导致CD3/4/8测定不准确,因此临床上现在都不建议单独使用这种设门方式,可以结合CD45/14来设门,或者干脆就选择用含CD45的试剂,用SSC-CD45设门。

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如果对结果不肯定的话就,就把上边的结果再和CD45设门的结果对比一下,如果差异太大,说明有单核细胞干扰。
CD45没有必要,因为单核细胞也是表达CD45,所以CD45无法将单核细胞排除。
FSC-SSC其实已经能够区分淋巴细胞和单核细胞。
如果要精确一些,标记CD3也能做到,因为只要在FSC-CD3散点图中将CD3设门,然后分析CD4和CD8就行了。
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star#room[使用道具]
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淋巴和单核细胞尽管都表达CD45,但表达程度不同,单核要弱一些。
1.通过SSC-CD45进行淋巴细胞亚型分析是标准的方法。单纯依靠FCS-SCS,已经被认为是“unacceptable”。
2.通过SSC-CD3进行淋巴亚型分析是BD 进行CD3/4/8绝对计数的方法,这个方法必须使用Trucount管,只能得出CD4/CD8的绝对值,得到的百分比是不准确的,原因如上。
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tuomu45[使用道具]
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弱弱的说一句,ssc-cd45设门跟FSC-SSC设门区别会很大吗?特别是像楼主提到“正常外周血”的时候,个人认为差别基本可以忽略。特别是对于学生阶段,花钱不容易(有条件当然建议ssc-cd45)。
另外,楼主的2个问题,第一个:正常(原因2、3楼解释了)。第二个指的是CD3+CD4+/CD3+CD8+(原因:CD3+是大前提,要分析cd4+或者cd8+的细胞团必然是cd3+的,否则既不是辅助T也不是抑制T)。
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greenbee[使用道具]
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同意楼上,其实CD4+/CD8+本身就是CD3+CD4+/CD3+CD8+,现在比较多的认可是:CD45+CDCD3+CD4+/CD45+CD3+CD8,,,建议加CD45,原因1,图片更加漂亮,结果更有说服力 原因2,在贝克曼的机器上能有效的减少杂质细胞的干扰。
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831226[使用道具]
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淋巴和单核细胞尽管都表达CD45,但表达程度不同,单核要弱一些。
1.通过SSC-CD45进行淋巴细胞亚型分析是标准的方法。单纯依靠FCS-SCS,已经被认为是“unacceptable”。
2.通过SSC-CD3进行淋巴亚型分析是BD 进行CD3/4/8绝对计数的方法,这个方法必须使用Trucount管,只能得出CD4/CD8的绝对值,得到的百分比是不准确的,原因如上。

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据我所知,单核细胞和淋巴细胞表达CD45是相似的,即使有区别,也是无法在FSC-CD45散点图上区分开来的,所以我说加CD45与不加一样。而FSC-SSC图中是能够明显区分淋巴细胞团和单核细胞团的,这个我做的很多,我是有绝对把握的。
另外,先设门CD3,再分析CD4和CD8的比例,常规方法就行,根本不存在需要什么Trucount管,而且所得结果也是最准确的。
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sunnyB[使用道具]
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建议按照一些公开的文献或指南中介绍的方法来。毕竟我们不是权威,研究这东西靠的是有说服力的结果,而不是经验。
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