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标题:【求助】用VEGF刺激不出内皮细胞的增殖，怎么办？

wu11998866[使用道具]
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发表于 2013-1-11 10:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】用VEGF刺激不出内皮细胞的增殖，怎么办？

我现在研究VEGF促进内皮细胞（HUVEC）的增值作用。

实验中我发现，VEGF（10,20,50，100,200ng/mL）刺激HUVEC 24小时，48小时后，细胞没有出现明显增值（MTT）。我是把HUVEC按照2500 cells per well接种在96孔板中的。培养24h后，无血清处理过夜。然后第二天加入不同浓度的VEGF（用无血清培养基稀释）处理HUVEC细胞24h,48h。MTT分析结果发现VEGF处理组的细胞与正常对照（未处理组）的细胞的吸光度一致，无明显差别。不知道别人是怎么做的？我的问题出现在那里呢？

盼望回复！
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发表于 2013-1-11 10:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
MTT有的时候结果不准，你有没有在显微镜下观察细胞的增殖情况，现在检测增殖的方法很多，换一种方法试试
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发表于 2013-1-11 10:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
相似的问题也正困扰着我。

我分别用了3种细胞株：A549，B16，血管内皮细胞(Ealy 926)，VEGF浓度分别为0，10，50，100ng/ml，3H-TdR参入法测量细胞增殖能力。结果显示各种浓度的VEGF对上述3种细胞株都没有刺激作用。

我怀疑是VEGF的问题，现公司答应更换VEGF。
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wu11998866[使用道具]
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发表于 2013-1-11 10:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你用VEGF刺激细胞时接种在哪里？细胞密度呢？
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wu11998866[使用道具]
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发表于 2013-1-11 10:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
MTT有的时候结果不准，你有没有在显微镜下观察细胞的增殖情况，现在检测增殖的方法很多，换一种方法试试

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CCK-8法我也试了，结果是一样的，因此我觉得问题不是出在检测方法上，还是试验系统没有优化好。
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发表于 2013-1-11 10:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你用VEGF刺激细胞时接种在哪里？细胞密度呢？

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96孔细胞培养板，6000个/孔。

我同时做了3种抑制剂对上述细胞增殖的抑制作用，结果重复性很好，所以说明整个实验方法应该没问题，很可能是VEGF本身的问题。
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发表于 2013-1-11 11:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
相似的问题也正困扰着我。

我分别用了3种细胞株：A549，B16，血管内皮细胞(Ealy 926)，VEGF浓度分别为0，10，50，100ng/ml，3H-TdR参入法测量细胞增殖能力。结果显示各种浓度的VEGF对上述3种细胞株都没有刺激作用。

我怀疑是VEGF的问题，现公司答应更换VEGF。

请问楼主：我最近做的也是protech的VEGF，加到100ng/ml了，我也没有方发现明显的增殖，怎么办啊？你们是怎么 解决的呀？急死了
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49888[使用道具]
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发表于 2013-1-11 11:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我现在研究VEGF促进内皮细胞（HUVEC）的增值作用。

实验中我发现，VEGF（10,20,50，100,200ng/mL）刺激HUVEC 24小时，48小时后，细胞没有出现明显增值（MTT）。我是把HUVEC按照2500 cells per well接种在96孔板中的。培养24h后，无血清处理过夜。然后第二天加入不同浓度的VEGF（用无血清培养基稀释）处理HUVEC细胞24h,48h。MTT分析结果发现VEGF处理组的细胞与正常对照（未处理组）的细胞的吸光度一致，无明显差别。不知道别人是怎么做的？我的问题出现在那里呢？

盼望回复！
请问楼主，问题解决了吗？我最近也是这个问题，快把我纠结死了 ，伤心呀。protech的VEGF,死活没有增殖作用呀？快毕业了 ，数据一致耗着，急死我了，万分感谢
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