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标题:【讨论帖】细胞爬片的方法与心得

koook5695[使用道具]
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发表于 2013-1-13 11:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【讨论帖】细胞爬片的方法与心得

细胞爬片是细胞培养中比较经常会用到的，现将自己操作的一些方法与技巧拿与大家分享，如有不当的地方还望大家给与指正：
【爬片的准备】
1、爬片可用一般的盖玻片，也可用专用爬片；
2、应用盖玻片，可根据自己的需要剪裁成合适的大小，以备置于6孔板、12孔板或24孔板；
3、将剪裁好的爬片，置于浓硫酸中浸泡并过夜，第二天先用自来水冲洗20遍，再用三蒸水冲洗3遍（个人认为主要目的是冲洗干净就可以了），放在饭盒或者培养皿（一定是玻璃的哦，要不然就……）中烘干后进行高压消毒。
【培养板的准备】
1、 泡酸过夜
2、 冲洗，烘干（1、2步骤与前大致相同）
3、 放入超净工作台用紫外线照1～2小时就可以用了（在照之前可以将爬片一并放入，若细胞贴壁能力不强，可经多聚赖氨酸浸片后放入。贴壁能力强的话，就可以省略了，进行紫外线消毒）
注： 此步自己的经验是爬片可以先浸入消毒后的PBS内，紧接着放入培养板内。目的：浸过PBS的爬片依靠表面的液体，可以用培养板孔底贴和紧密，以利于细胞长到爬片上。（自己刚开始做的时候，经常就是细胞全都长在了爬片与培养板之间，爬片上细胞罕见。）
【细胞爬片】
1、 胰酶消化细胞后计数
2、 根据自己的需要选择合适的细胞密度种入培养板内即可
3、 第二天即可进行干预措施
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nut6694[使用道具]
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发表于 2013-1-13 11:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

爬片用的多聚赖氨酸浓度是多少？
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utt0989[使用道具]
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发表于 2013-1-13 11:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那个盖玻片也能够剪啊？？？
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koook5695[使用道具]
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发表于 2013-1-13 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 nut6694 于 2013-1-13 11:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

爬片用的多聚赖氨酸浓度是多少？

多聚赖氨酸用10％
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koook5695[使用道具]
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发表于 2013-1-13 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 utt0989 于 2013-1-13 11:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

那个盖玻片也能够剪啊？？？

[size=2]可以用小刀轻轻的划开，分成小块。单要注意力度，盖玻片容易碎
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vcve[使用道具]
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发表于 2013-1-13 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想请教一下,盖玻片用多聚赖氨酸处理的问题.正确的处理顺序是不是这样的? 玻片泡酸过夜,冲洗烘干,高压消毒,多聚赖氨酸浸片,烘干,紫外照射,浸PBS,然后放入培养板?
我觉得盖玻片好薄好脆弱,实际操作中真不知道该怎么拿它,是不是用镊子?
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发表于 2013-1-13 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一个小窍门：爬片消毒前要仔细的一片一片分开，摆放在纱布上烘干或者直接高压，否则干了之后片子粘一起分不开的。
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koook5695[使用道具]
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发表于 2013-1-13 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 vcve 于 2013-1-13 11:23 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我想请教一下,盖玻片用多聚赖氨酸处理的问题.正确的处理顺序是不是这样的? 玻片泡酸过夜,冲洗烘干,高压消毒,多聚赖氨酸浸片,烘干,紫外照射,浸PBS,然后放入培养板?
我觉得盖玻片好薄好脆弱,实际操作中真不知道该怎么 ...

基本上就如你所说的

不过我们所用多聚赖氨酸是过滤除菌的，所以在给爬片上滴加多聚赖氨酸时（此时已把爬片放入培养板内），操作是在超净工作台下进行的。滴加完后，直接将放置好爬片的培养板放在超净台内风干。
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vcve[使用道具]
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发表于 2013-1-13 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不好意思啊.还有一个问题我没想懂.就是PBS和多聚赖氨酸的处理顺序问题.是不是片子浸过PBS后就放到培养板内(这期间需要等着片子表面的PBS溶液干吗?)然后紧接着就滴加多聚赖氨酸,然后等着表面风干?谢谢koook5695！
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发表于 2013-1-13 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不知道哪位有用胶原蛋白I铺片的，胶原蛋白I怎么除菌，是否直接加入1/10倍体积的三氯甲烷就可以达到灭菌的效果了？
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