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标题:【讨论帖】流式细胞仪的应用交流,贴出你的经验

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发表于 2013-1-13 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【讨论帖】流式细胞仪的应用交流,贴出你的经验


各位朋友,近来接触了流式细胞仪,碰到了很多同学在做这方面的实验,说实话,国内大多数的实验的应用都还是很简单的,但是不少人走了很多弯路,浪费了很大的人力,物力,财力.最后还要挨老板的批,开此贴,希望能对实验人员有益.说出我的经验,提出你的问题,,,,,,,,,我们在路上!
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发表于 2013-1-13 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

流式细胞怎么检测某种表位阳性细胞在所有细胞中的纯度？
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发表于 2013-1-13 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你所提的这个问题是流式目前应用最多的实验,前提条件:
1)某种表位阳性细胞有合适的荧光标记抗体.
2)所有的细胞这个概念比较模糊,在流式分析中,可以精确到某个亚群/某系/收集的所有细胞等多种说法,这个数据可以通过设门很容易得到.

不知道这个答复你是否能理解?
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发表于 2013-1-13 16:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

<一>用流式细胞仪分析未知浓度溶液中细胞数量的方法

取二份正常人的外周血,A份WBC计数在4*10~9个/L,B份WBC计数在10*10~9个/L,此数据可以用三分类或五分类血细胞分析仪器分析得到.每份上述血样取50ul加入流式管中,加入450ul溶血素,混匀,室温避光放置10min.上机器.未知样品C取50ul加入流式管中,加入450ul溶血素/PBS(提取细胞),混匀,室温避光放置10min.上机器分析:
原始细胞浓度 分析细胞速度(相同取样体积,相同添加体积,相同上样速度)
A 4*10^9 L M
B 10*10^9 L N
C ??? H

???=Y=10^9[10+6(X-N) /(N-M)],代入H=X，即可计算出未知浓度溶液中细胞的数量。

这个方法很简单,能够计算细胞的大概浓度,有助于我们进行下一步的确定细胞和抗体的用量.

当然,计数细胞的浓度还有其他办法,常见的有牛鲍氏计数盘等.
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发表于 2013-1-13 16:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用流式细胞仪做细胞周期，想问一下，为什么我做出的图上看不到G2峰呢？
这可能是什么原因呢？
还有就是G1峰的CV值偏大，>8% 大概在9.6%，如何才能改进呢？
谢谢
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发表于 2013-1-13 16:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
首先解决第一个问题：
1）G1峰的CV值偏大，>8% 大概在9.6%
流式分析细胞周期的要求是G1期的CV小于8%，CV过大，分析的结果基本就不可靠了.在评估你实验样本的CV的时候，你应该要求仪器的实验人员用微球（仪器厂商提供）或者细胞周期检测试剂中的鸡红细胞等检测仪器的CV值，一般要求在3%以内才可以接受然后进行实验样品的检测。如果这个过程评估没有问题，再考虑样品的是否存在问题并且再去想问题解决它。

2)G2M期看不到的问题比较复杂，首先要能检测到G0G1期细胞的峰，G2M期的出现和你的细胞状态有关，非常有可能你所检测的样本不存在这个周期的细胞，这与你的细胞选择，细胞处理过程，刺激过程等有关。
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发表于 2013-1-13 16:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

体外校正和体内校正，怎么做
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发表于 2013-1-13 16:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
体外校正和体内校正，怎么做

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你所说的这个校正是什么意思，能解释下吗
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发表于 2013-1-13 16:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
体外校正和体内校正，怎么做

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你所说的这个校正是什么意思，能解释下吗
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 小中大

流式细胞术 检测RAW 264.7细胞表面TLR4受体表达变化情况

各位老师 我准备用TLR4的一抗 和荧光素二抗来标记胞膜表面受体 然后用流式细胞术测得的荧光强度或带荧光的细胞个数来判定胞膜TLR4受体表达量改变情况 但由于巨噬细胞吞噬能力很强 我必须在保证包膜表面蛋白标记的同时尽量避免非特异性吞噬产生胞内TLR4标记干扰 （疑问：流式细胞术能否测的胞内的荧光物质？） 由于之前没有做过相关的实验 请各位老师能提供比较详细一点的操作步骤介绍
同时 我还看到文献中有以一抗同源IgG 作为对照的 这个对照是什么目的？
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