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标题:【讨论帖】正在养或已经养过HUVEC的请进。

free[使用道具]
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发表于 2013-1-13 16:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【讨论帖】正在养或已经养过HUVEC的请进。

养HUVEC的战友不少，让我一起来分享、交流培养HUVEC的经验，为了进一步方便大家交流
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小野花[使用道具]
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发表于 2013-1-13 16:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我一直培养HUVEC，但生长很慢，不知你们培养的情况如何。我的培养基中的ECGS为55UG/ML。这样的量还行吧？
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发表于 2013-1-13 16:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我一直培养HUVEC，但生长很慢，不知你们培养的情况如何。我的培养基中的ECGS为55UG/ML。这样的量还行吧？

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因为没有用过ECGS进行培养，所以不太清楚使用量，可以请青衫兄来解答一下。今天晚上给HUVEC传代，进行种植。不顺。在加胰酶前用培养基冲洗以后，发现细胞突然变圆。可能与培养基，以及细胞的量（今天70～80％）不足，还有冲洗力度有关。分析最大可能细胞量少，冲洗力量过大有关。
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发表于 2013-1-13 16:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也有几点经验，请方家指正：

由于M199中含有的VC不多，而内皮细胞最易遭到氧化损伤，故在配置2~4周后的M199中应该添加VC，建议浓度10uM；
务必使用名牌血清，如Hyclone的标准胎牛血清；
为了控制平滑肌细胞及成纤维细胞的生长，可以适量添加肝素，如5u/ml；
如果没有使用胶原包被的瓶子，可使用一次性塑料培养瓶（Corning），内皮细胞通常能够很好地在新瓶子上贴壁，一个瓶子一般至少可以传3代。但是随着消化次数增加，细胞贴壁明显受到影响；
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发表于 2013-1-13 16:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想问下，复苏HUVEC离心时，离心的速度与时间怎样的？实验室的老师建议我1000rpm 15~20分钟，文献上报道大多在5分钟左右。

可我上次复苏离心5分钟，细胞好像没下来都丢了。
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发表于 2013-1-13 16:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般离心10分钟是比较保险的，这样细胞团比较紧密，换液时不易破坏沉淀，也能将上清吸得比较干净。继续延长时间似乎没有好处。
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发表于 2013-1-13 16:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想问下，复苏HUVEC离心时，离心的速度与时间怎样的？实验室的老师建议我1000rpm 15~20分钟，文献上报道大多在5分钟左右。

可我上次复苏离心5分钟，细胞好像没下来都丢了。

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如果你离心之后肉眼没有看到细胞沉淀，那么说明离心程度不够（如果冻存时细胞很多的话）。复苏后细胞的生长状态与很多因素有关。如果一开始冻存没有做好，那么复苏后 细胞生长也很差劲。再就是离心时注意时间的计算，待转速达到所需时，开始记时。
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发表于 2013-1-13 16:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢楼上两位的回复，我想下午复苏一瓶看看，希望自己好运气！
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发表于 2013-1-13 16:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我一直培养HUVEC，但生长很慢，不知你们培养的情况如何。我的培养基中的ECGS为55UG/ML。这样的量还行吧？

我觉得你的ECGS浓度有些低,我用的是SIGMA公司的ECGS,所用浓度为75UG/ML,另外血清也很重要,以前用的国产血清,贴壁及生长不大好,换用HYCLONE的胎牛血清,细胞生长状态还好!希望你能顺利!
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2013-1-13 16:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
因为没有用过ECGS进行培养，所以不太清楚使用量，可以请青衫兄来解答一下。今天晚上给HUVEC传代，进行种植。不顺。在加胰酶前用培养基冲洗以后，发现细胞突然变圆。可能与培养基，以及细胞的量（今天70～80％）不足，还有冲洗力度有关。分析最大可能细胞量少，冲洗力量过大有关。

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版主也没有用过ECGS，都是用的是ECGF，不过两个的主要成分差不多的。呵呵！就是纯度的问题了。帮常子兄弟查了查文献，看样子都是用的50ng/L（也就是50ug/ml），也有用高一些的，100ug/ml的，文献都附在下面。
另外，你做实验的可以看情况，要是细胞长得不好就多加点生长因子吧。不过，最好是用好点的胎牛血清。
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