小中大我在做小鼠脑蛋白的提取,用的是公司购买的RIPA裂解液,取一半脑组织约200mg,加1ml裂解液,10ul100mMPMSF,电动匀浆器,匀浆之后,冰上半小时,13,000rpm离心半小时,取上清,电泳
12%PAGE胶,电泳,考染后看不到15KD以下的条带,
请有经验的战友,指点一下,到底哪里操作有问题,提取小分子量蛋白有什么需要注意的地方,谢谢,我的目的蛋白11KD ,
另外我的小蛋白SUMO会和其他蛋白结合,也会杂下来我想同时看100以上的条带,是否该选择梯度胶,浓度范围应选择多少呢,期待解答,谢谢
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裂解液的量有些少
一般用1:9或者1:10(组织重量:裂解液量)
100K不需要用梯度胶
15K以下条带本来就较少