液相色谱

最近在建立一产品的质量标准
其中纯度一项弄得很头疼
色谱条件如下：
紫外检测波长：210
流动相：乙腈：水：磷酸=45：55：0.1
ODS（150*4.6）
样品用流动相溶解稀释

每次在1.5分钟左右，都会出现两杂质峰
进空白样品，两杂质峰也会出现
杂质峰面积随着进样量的增加而增加
一般认为就是流动相的原因
但是我不插入进样针，直接扳下进样器进样，又没有两杂质
现在不明白就是到底两杂质算不算在面积归一法内计算？
希望有经验的朋友帮我分析一下
谢谢！

既然“进空白样品，两杂质峰也会出现”，证明这两峰实为溶剂峰，自然不应计算在内。

柱平衡后，在定量环里的是和流动相一模一样的东西，“直接扳下进样器进样，”实际上只是命令电脑对检测信号进行记录，自然和平衡后的柱子走的基线是一样的“平”，不足为怪。

看一下样品溶解后流动相PH值与空白有没有差别，可能是PH值造成的，没有定量环吗，峰面积怎么随进样量改变呢？

直接扳进样器没有峰，进空白有，说明这两个峰和空白溶剂有关，很可能就是样品稀释剂引起来的，这个应该可以当空白扣除

没有具体明白楼主做的什么实验？
不过有几点建议吧
1. 流动相尽量不要直接选用酸或者碱吧，如果需要一定的pH氛围，还是选用缓冲盐比较好，至少能够避免pH波动造成的影响
2. 楼主用的紫外？我几乎没有听说用这个做归一法的呀？
3. 不是能够扣除空白的么？

能不能换个波长试试呀，避免溶剂峰 的干扰

应该扣除，我以前用类似条件也有这样的问题。理论上说，磷酸不该有这么大的波动，但是实际情况就这样。以前我用的岛津10A的双泵，手动进样。

现在用Agilent的自动进样，比手动进的稳定，是不是溶剂峰比以前容易判断了。

每次在1.5分钟左右，都会出现两杂质峰
进空白样品，两杂质峰也会出现


应当把两峰当空白溶剂峰扣除。
进样和进空白操作完全一样都会产生两峰。