小中大黄曲霉毒素分析方法---免疫亲和净化柱/UVE法
一、免疫亲和净化柱/UVE法简介:
利用德国LCTech品牌AflaCLEAN 净化柱可以将黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2专一分离出来,然后用HPLC/FLD分别测定黄曲霉毒素 B1、B2、G1、G2。
二、免疫亲和净化柱/UVE法特点:
专用AflaCLEAN 净化柱使得样品制备与提取简单快速,成本低
灵敏—HPLC可至30ppt—200ppt(黄曲霉毒素B1)。
简便实用,衍生化没有衍生试剂消耗(通常柱后衍生均需要使用衍生试剂,分析成本高,操作麻烦,仪器故障率较高)
回收率高
三、免疫亲和净化柱/UVE法操作步骤简介:
1、 提取样品:研磨、称重50g样品;用甲醇/水(80/20 V/V)混合物将样品高速混匀 1 分钟。
2、 过滤:将提取的样品滤膜过滤,然后再过0.4 μm滤膜。
3、 吸附、淋洗:将滤液2 ml加到 8ml PBS 缓冲液(pH 7.2)后,通过AflaCLEAN 净化柱,流速不大于1 mL/min;用10ml水清洗亲合柱;用甲醇1ml 两次将黄曲霉毒素从亲合柱上淋洗下来,并收集于HPLC进样小瓶中。
4、 测定:HPLC直接进样,在经过柱分离后,被UVE衍生化,被荧光检测器记录各种黄曲霉毒素的浓度。
四、UVE™ 和 HPLC参数
UVE™ 波长:254 nm
HPLC-柱 : 150 x 4.6 mm; C-18
洗提液: 水 / 乙腈 / 甲醇 (60 / 15 / 30 // v / v / v)
流量:1.0 mL/min
柱温: 30 °C
进样体积: 20 – 100 μL
λ-激发波长: 365 nm
λ-发射波长: 440 nm
五、主机配置
德国LCTech公司 UVE™ 主机,配有1ml反应池,9v 紫外灯 254nl
UVE™ 主机 黄曲霉素免疫亲和AflaCLEAN净化柱 黄曲霉素 ELISA试剂盒
以下为德国LCTech公司黄曲霉素相关产品订购信息:
产品货号
产品名称及规格
数量
10514
AflaCLEAN™, Aflatoxins B1, B2, G1, G2 25 columns/pck 3mL, widebore column黄曲霉素3ml净化柱,25支/包
1盒
11022
Afla-OtaCLEAN™, Aflatoxins B1, B2, G1, G2 & Ochratoxin A 25 columns/pck 3 mL, widebore column 黄曲霉素-赭曲霉素二联3ml净化柱,25支/包
1盒
11139
AflaREAD™, ELISA Kit (96-well plate/stripes) for detection of Aflatoxin B1 in food and feed samples黄曲霉素 ELISA试剂盒包,96孔
1盒
10837
Standard, Solution of 4 different aflatoxins in acetonitrile B1, G1, B2, G2,5 mL / Vial
Packaging: amber glass ampule; BRM002021; Storage: dark and cool at 4°C 黄曲霉素4种异构体混合标样。5ml装,4度阴暗保存
1盒
10519
UVE™ Photochemical Reactor for Aflatoxin Analysis;254 nm lamp; ready to use, CE-certification, 240 VAC, 50 HzUVE UVE柱后衍生系统,254nm紫外灯
1套
10522
HPLC-Column for Aflatoxin Analysis, Reversed Phase C18 150 x 4,6 mm 黄曲霉素专用HPLC柱
1根
10750
预柱卡套
1个
10523
HPLC column (3 pcs) C18 8 x 4 mm 预柱
1根
10896
黄曲霉素LCTech免疫亲和柱专用玻璃漏斗,用于贮存需要过柱的液体样品,2个/包
1包
10081
玻璃漏斗夹子
1个
12671
Freestyle单通道全自动SPE固相萃取系统主机(不含配件及消耗品)
1套
11020
AcceCLEANTM, robotic system for handling of LCTech IAC-columns, up to 30 samples 全自动LCTech免疫亲和柱三通道自动SPE系统,标准系统可达30位样品(不含配件及消耗品)
1套
11146
EluVac™, 20位手动固相萃取套件,包含主机,10位样品盘(用于玻璃漏斗10896)和60ml收集盘
1套
11147
EluVac™, 20位手动固相萃取装置,包含主机,10位样品盘和6位100ml椎底烧瓶收集盘
1套
11125
防腐蚀化学真空泵
1个