液相色谱

各位大侠：
小弟目前正在做四环素和雌二醇的共分离实验，但两种物质各自的最优分离条件都无法分离出另一种物质，即完全无信号响应。不知我这同一色谱条件分离此二种物质的目标能否实现？

目前我使用的四环素色谱条件：
流动相为甲醇-缓冲液（0.1 mol/L丙二酸+0.05 mol/L氯化镁，用氨水将 pH值调至 6.5）(50:50, v/v)，流速为1.0 mL/min。采用荧光检测，激发波长为 375 nm，测定波长为 535 nm。

雌二醇色谱条件：
流动相为乙腈-水（55：45，v/v）。采用紫外检测，波长为205nm。

色谱柱为C18，25cm柱。

谢谢各位！

你的困扰现在还只是来源于检测器的“顾此失彼”，那首要任务就是选用一个可以兼顾的检测器了：可以咨询一下工程师，试试蒸发光散射或示差折光检测器。有了适当的检测器就可以摸分离条件了。注意：蒸发光散射检测器流动相不易加缓冲盐和其他难挥发酸碱；示差折光检测器不能走梯度。

其实现有条件下，可将两台检测器串联，用同一测试方法进混合样，通过保留时间不就可以看出分离效果了吗？优化方法也就不在话下。当然，两台液相用同一方法做效果也一样。

比较难。条件差别很大。而且检测器都不一致啊。
一个条件下一种物质出峰，另一个物质可能在此条件下不出峰或没有保留。
需要找到一个折中的条件。

看你的仪器是否具备条件，我的荧光和紫外可以串联直接检测四环素流动相改掉就可以了

串联荧光和紫外一起检测的，但是对于另外一个物质就是完全不出峰。

乙腈-水或者水里加点KH2PO4，走梯度，肯定可以的