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陆英(HerbaSambuciChinensis)系为忍冬科接骨木属植物，生于山坡、路旁、溪边、荒野灌丛中。产于长江以南地区。据报道[1]陆英草含氯原酸、α-香树脂素棕榈酸酯(α-amyinpalmitate)、乌索酸、β-谷甾醇、豆甾醇、油菜甾醇、硝酸钾、黄酮、鞣质等。目前其它中药材乌索酸含量的测定多采用比色法及薄层扫描[2]以及衍生化法气相色谱检测[3]，其操作繁琐，显色及前处理误差大，费事费力。

本文采用高效液相色谱法用甲醇-水为流动相，检测波长210nm，在C18反相色谱柱上建立了其含量的测定方法，具有简便可行、准确、快速、物质分离效果好的优点，重现性好，适应范围广，利于对陆英草的准确、深入研究。

实验部分

一、仪器设备及试剂

Waters600EHplc系统，UV-2487可变波长检测器，20ul定量环，M32数据处理工作站。

乌索酸对照品：中国医学科学院药物研究所95%乙醇(AR)甲醇(AR)水

二、实验方法

1、色谱条件色谱柱:Waters-ODS150×4.6mm(5um);

流动相：甲醇-水(90：10);流速：0.8ml/min

UV波长：210nm;量程：0.005AUFS;温度：25℃

数据处理：峰面积外标定量。

2、样品处理

(1)将原料(樟树医药公司)的叶粉碎过筛并恒重。

(2)称取样品10克，置索氏提取器中，加95%乙醇回流提取8小时，提取液浓缩定容于100毫升的容量瓶中，取上清液约5毫升过针式过滤器过滤，取滤液待测。

3、标准曲线的确定

分别吸取配好的5.0mg/ml乌索酸标准液0.4、0.8、1.6、2.8、3.6ml置于10ml容量瓶中，用甲醇稀释成0.2、0.4、0.8、1.4、1.8mg/ml系列标准溶液，在选定的色谱条件下，重复进3次每次20ul,以标准品峰面积与浓度关系得出回归方程：

Y=3.35E 005X 8.74E 003R=0.9999

4、样品测定

将预处理好的待测样品液进样20ul检测，通过软件操作的得出浓度值。

三、结果

1、乌索酸对照品与陆英样品的色谱图1

图1图2

2、方法重现性用两个浓度水平进行连续和间隔时间及连续3天测定，考察方法重现性。结果：其最大相对标准偏差小于4.0%。

2、加标回收率吸取5.0mg/ml乌索酸标准液0.8、1.6、3.6各三份，分别加入原料样品10克，按前法操作，测定结果，计算回收率结果为99.9%-100.8%，平均100.4%，RSD为1.0%。

讨论

1、迷迭香中的乌索酸是非极性五环三萜类酸，在C18反相柱上有较大的保留值，以甲醇和水二元体系作为流动相，甲醇浓度与极性相近共存物质的分离及峰形有显著影响，本法选定比例是考虑实际样品组分分离确定的，对于其它品种样品可作适当的调整。

2、检测波长我们进行了波长扫描，乌索酸在205nm处有最大吸收峰，本法采用210nm，恒流比流动相洗脱对检测无影响。

3、本法检测出陆英草中平均含0.28%的乌索酸。

4、本法简便、易行，准确快速。