离子色谱

请问，如何根据实验现象，自己做出判断，色谱柱柱效是否已经降低？

判断色谱柱柱效下降可以通过以下几个途径：

1.看峰分离度怎么样，分离度直接关系测试结果准确性，可以判断柱效是否下降，柱效下降分离度一般会变差。

2.通过谱图峰型的变化，是否有严重前伸和拖尾现象，峰型是否规则来看，如果峰型很差了，柱效已经下降了，可以及时采用乙腈和甲醇等溶剂进行修复。

3.通过压力变化和出峰时间来判断，一般柱效下降时伴随着柱压的升高和降低，此时出峰的时间也会和之前有很大差异。

曾看到网上帖子：“延长色谱柱使用寿命的方法”   应该是讲HPLC的但是我觉得对离子色谱也有很大的借鉴意义，拿来分享一下。

色谱柱的使用寿命，除了与所分析的样品和流动相及使用频率有关系外，最主要的是与日常的委会密切相关。为延长色谱柱的使用寿命，维护您的利益，请仔细阅读此部分。

色谱柱的使用寿命主要是分局柱效和柱压两个指标来衡量，如果一支色谱柱柱效太低或柱压太高，通常被认为该色谱柱已经结束。因此，延长色谱柱使用寿命的关键是，消除引起柱效下降和柱压升高的因素。以下是色谱柱的日常维护方法：

一、流动相的PH应在使用的范围内

Welch公司的色谱柱除反相氰基柱PH1.5-9.0外，其反相色谱柱的PH范围均为1.5-10，由于填料中存在Si-C和Si-O键，流动相超过其PH范围将会导致硅胶基质流失和键合相碳链断裂，使柱效下降，使用寿命变短。由于流动相的PH 控制不当而对色谱柱造成的损害，通常很难是色谱柱恢复，因此必须认真对待，严格控制流动相的PH值。

二、去除样品和流动相中的固体颗粒

样品和流动相中含有的固体颗粒物质会堵塞色谱柱筛板，筛板被堵住不仅会引起柱压的升高，而且也会引起柱效下降，因为筛板的堵塞会引起液流不均，导致色谱峰型拖尾、变宽，从而使柱效下降。因此，建议使用超纯水和色谱纯试剂，在分析样品前对样品进行针筒过滤，流动相过0.45μm滤膜。

三、使用保护柱或在线过滤器

样品和流动相经过滤后并不能完全消除固体颗粒物质，因为泵的磨损、密封圈和管路的老化也会产生固体颗粒物质，这些固体颗粒被流动相带入色谱柱，堵塞筛板，导致柱压升高、柱效下降。保护柱和在线过滤器上都有筛板，其孔径与色谱柱孔径相同，因此可以阻止固体颗粒物质到达色谱柱，有效防止色谱柱筛板的堵塞。由于柱压升高在分析故障中占很大 比例，因此，除对样品和流动相进行过滤外，建议您在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器。

如果确认色谱柱柱压升高是由于进样端筛板被堵引起的，可选择一下方式进行补救：

1、先在色谱柱前加上保护柱或在线过滤器，然后用甲醇、水=20/80ml/min反向冲色谱柱180min。

2、先在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器，然后反向使用。

四、正确使用缓冲盐

缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂，因此缓冲盐使用不当会使其析出，堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙，使填料板结，柱压上升；同时阻碍了基质上键合的碳链自由舒展，使色谱柱的保留能力下降，柱效降低。缓冲盐析出后，去除非常困难，因此，正确的使用缓冲盐对延长色谱柱使用寿命非常重要。

正确使用缓冲盐的目的是防止缓冲盐析出，因此正确使用缓冲盐的方法可归结为一句话：使用前要过滤，使用后要冲洗。具体方法如下：

1、等度条件：使用缓冲盐前和使用后需用过渡流动相以1.0ml/min流速冲洗60min；使用后去除缓冲盐的另一个方法是用过渡流动相以0.2ml/min流速冲洗色谱柱过夜。

2、梯度条件：用含有缓冲盐的流动相跑梯度之前，用与初始流动相组成相同的过渡流动相以1.0ml/min流速冲洗60min，再用该过渡流动相以1.0ml/min冲洗色谱柱120min。含缓冲盐流动相的梯度设定应尽量平缓，以避免梯度过程中缓冲盐析出。
注意：过渡流动相是指有机相和水相的组成与分析流动相相同，区别只是过渡流动相不含缓冲盐。

3、缓冲盐析出的补救方法：

1）方案1：用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35摄氏度条件下反向冲洗色谱柱120min

2）方案2：用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向冲洗色谱柱过夜。

五、防止强保留物质在色谱柱上存留
强保留物质和大分子化合物在色谱柱中累积，对样品中的化合物产生额外的保留行为，不仅引起峰型变宽、拖尾，使柱效下降，同时也会引起保留时间的变化，累积到一定程度时还会导致柱压升高。由于强保留物质和大分子化合物对色谱分离的影响是一个累积效应，需要一定的时间才会体现出来，但对许多药品特别是复杂样品而言，很难判断其是否是含有强保留物质，因此要防止强保留物质的累积，需要在每天的日常维护中用纯甲醇或乙氰清洗色谱柱。

清洗方法：

1、未使用缓冲盐：每天分析完成后，先用上述方法除去缓冲盐，然后再用甲醇或乙氰反向冲洗色谱柱60min。

2、使用过缓冲盐：分析完成后，先用上述方法除去缓冲盐，然后在用纯甲醇或乙氰反向冲洗色谱柱60min

3、补救方法：
水——乙氰——氯仿（或异丙醇）——乙氰——水
每一步以1.0ml/min流速反向冲洗色谱柱60min。

网友fsciq也写过“高效液相色谱仪操作三要点”，cuturl('http://www.antpedia.com/?uid-19-action-viewspace-itemid-29402')

其中提到色谱柱时是：

4、色谱柱

       对柱子的污染是随使用时间而增加。通常表现是：运行走基线时在记录的色谱图中基线噪音增加，泵压也增加。解决这个问题的最有效方法就是在每一批样品分析结束后或准备卸下柱子时用大量的流动相冲洗柱子（例如，甲醇、乙腈和水）。用梯度冲洗效果更好，具体的比例要根据柱子的说明书和性质而定。

离子色谱确实比较特殊，

1.pH范围，色谱柱如果采用硅胶基质则pH不能太高，但目前大多数色谱柱的基质都是采用的高分子聚合物，pH都是兼容0-14的。

2.淋洗液就是普通的酸碱盐，有机溶剂用的很少，只在一些特殊应用的时候才添加作为改进剂。所以其一直号称对环境友好。据说不少准妈妈都是从液相调到离子部门去工作的

色谱柱效率对什么有影响？

顺着这条线走应该可以解开问题的疑团。

峰的分离度情况，宽峰，还有塔板数是不是在同样条件下降低了。

1) 保留时间变短；
2）理论塔板数降低；
3）峰对称度变差；
4）分离度减小。

判断色谱柱柱效下降可以通过以下几个途径：

1.看峰分离度怎么样，分离度直接关系测试结果准确性，可以判断柱效是否下降，柱效下降分离度一般会变差。

2.通过谱图峰型的变化，是否有严重前伸和拖尾现象，峰型是否规则来看，如果峰型很差了，柱效已经下降了，可以及时采用乙腈和甲醇等溶剂进行修复。

3.通过压力变化和出峰时间来判断，一般柱效下降时伴随着柱压的升高和降低，此时出峰的时间也会和之前有很大差异。

4.还可以根据新的柱子的保留时间判断,看重复性,平行性如何.

5.再者,咨询专家.

学习了，可有个问题不明白，柱子不是不能反冲吗？好像反冲对柱效影响也很大的，还有，反冲后柱子是不是就一直反接啊？