液相色谱

我摸索某品种的液相检测有关物质的流动相成分（恕不能提供具体样品名称，貌似这种样品对PH比较敏感），昨天的时候感觉摸索的差不多了，流动相成分为：磷酸二氢钾（0.02mol/L，PH6.8）-TBAH溶液（10%四丁基氢氧化铵水溶液，PH7.5）-乙腈=790：70：140。我用的岛津LC- 10AT的液相，双泵高压梯度，一台泵走磷酸盐，一台泵走有机相，样品用流动相溶解，柱子是普通C-18柱，走出来的图比较好看。

但是今天，还是这个成分的流动相，就是把所有的溶液都混在一起，用一台泵走流动相，结果主峰变成了两个连在一起的峰，根本分不开。跪问各位高手这是什么原因啊，流动相用一台泵合着走难道就和两台泵分着走差距这么大吗？？

那保留时间是不是也延长，理论塔板数也下降了呢？

原因之一是不同的仪器由于管路连接的优略造成样品的柱前、尤其是柱后扩散效应不同导致的。柱前到进样部分的管路应尽量避免死角，柱后与检测器的连接应尽量短，减小柱后扩散，避免分开的峰又扩散交叉到一起。
原因之二可能就和乙腈有关了。乙腈易挥发，如果用双泵，不存在这个问题，单泵就不一样了，随着时间的延长，有机相比例将逐渐减少，造成保留时间延长。如果是正向，保留时间将缩短。当然这个应该不是主要原因。

所以本人的意见是单泵应被淘汰了，至少采用多元泵，使极性相与非极性相在泵内混合，流动相比例就更易确定和控制。你单泵把流动相人为混一块，效果不好再加适当乙腈或水调好了，你也不知道确定比例了，既浪费又徒劳！

走的就是等度啊，只是开始的时候是两个泵，后来用一个泵了，按理说都应该一样吧

可能有两个原因：

1、手工混合流动相时出错了

2、仪器混合器不准了

自己排除以下啦

重复一遍实验看看或者有可能是柱子原因

是不是你混合后流动相的处理不够？还是前一天的柱子没有冲好？或者你太极了，仪器的平衡不够

pH可能发生了变化。新配流动相试试，不行，再重新调整pH

流动相和样品都是新的吗？也有可能是流动相混合时，手动混合不准确造成的