液相色谱

一、背景

国标GB/T 22509-2008中利用22g的氧化铝柱进行油脂中的苯并（a）芘测定的前处理，利用氧化铝吸附油脂，通过80mL的石油醚或正己烷进行洗脱苯并（a）芘。该方法使用溶剂多，操作时间长，而且氧化铝对某些油样的净化效果较差。

本实验利用Cleanert BAP-2固相萃取柱（装有经过特殊改性的活性炭）萃取油性样品中的苯并（a）芘，然后再用甲苯洗脱的方法，开发了一套油脂中苯并（a）芘检测的新方法，相对于国标GB/T 22509-2008的方法，具有更佳的油脂去除效果、稳定的苯并（a）芘回收率，溶剂用量更少更环保，方法也更简便。

二、实验方法

2.1实验试剂及标准品

正己烷（色谱纯，4L/瓶，P/N: AH216），二氯甲烷（色谱纯，4L/瓶，P/N: AH300），甲苯（色谱纯或分析纯重蒸），乙腈（色谱纯，4L/瓶，P/N：AH015-4）

苯并（a）芘（100mg/瓶，P/N: B1760）

2.2实验仪器及耗材

Agilent HPLC，配荧光检测器，移液枪，PTFE滤头0.22μm（P/N：AS041320-T）。

三、实验步骤

3.1试样处理

（1）使用正己烷配制200ppm苯并（a）芘标准品标样备用，并用正己烷稀释成1ppm苯并（a）芘工作液备用。

（2）取0.3g油于12mL样品瓶（P/N：1509-1800和P/N：1515-1748）中，加1mL正己烷涡旋震荡溶解，作为待净化液；若要做加标实验，根据需要向油中先加入适量的标准品。

3.2 固相萃取方法

固相萃取柱名称：Cleanert BAP-2 (P/N：Bap10-2)；

固相萃取方法如下：

活化：2mL正己烷；

上样：3.1中的待净化液；

淋洗：6mL二氯甲烷；

洗脱：甲苯12mL，收集于20mL玻璃瓶（P/N：AV7100-7和P/N：AV7920-0）中

浓缩：将样液在80℃下氮气吹干，用0.3mL正己烷定容，过PTFE 0.22um滤头，收集于1.5mL样品瓶（P/N：1109-0519和P/N：AV2100-0）的内插管（P/N：0609-0357）中，待测；

3.3液相色谱法检测条件

（1）色谱条件：

色谱柱：Venusil ASB-C18，4.6mm×250mm×5.0μm（P/N：VS952505-0）；

流动相：乙腈：水 88%：12%； 流速：1.0mL/min； 进样量：20μL；

荧光检测器：发射波长406nm，激发波长384nm。

四、方法学考察

4.1 标准曲线绘制

将标准工作液稀释到浓度分别为：0.5，1.0，2.0，3.5，5.0，7.5，10.0μg/L，根据峰面积建立标准曲线。根据实际油样中苯并（a）芘的可能含量，可以将标准曲线的线性范围延伸到50μg/L。

4.2 样品分析

将3.1的样品进样分析，采用外标法定量。

4.3 计算公式 苯并（a）芘含量按下式计算：

　　其中：

w为样品中苯并（a）芘含量，单位为μg/Kg；

c为从标准曲线得到的待测液中苯并（a）芘的浓度，单位为μg/L；

V为待测液体积，单位为μL，本方法为300μL；

m为称取的油样品质量，单位为g；

五、测试结果

六、实验结论

Cleanert BAP-2 去除油脂中杂质的效果良好，前处理的操作过程简单快捷。检测方法可采用液相色谱-荧光检测法，在5μg/L的添加水平的回收率可达85%以上。

（来源：博纳艾杰尔科技）