液相色谱

我用的是waters High-Performance Carbohydrate糖柱测定中药酸水解液中鼠李糖的含量,流动相为乙腈:水(70:30),第一次做的时候对照品,鼠李糖都呈单峰(虽然峰形较宽,不好),但到第二次的时候再测对照品时,已呈明显双峰(未完全分开),对照品是用纯水配制的.另外样品的也是呈双峰.
我起初怀疑是鼠李糖对照品不纯(用的是鉴别用的),但为何第一次又不成双峰呢?怀疑是鼠李糖不稳定分解了?但好像鼠李糖在水中应该是很稳定的吧?
不知道是什么原因?急求各位老师指点一下!!急!

有没有保护柱、预柱之类的？

鉴别用的对照品纯度不高。

第一次可能是没有分开而已。

检测原理：表面活性剂糖脂分子结构中含有五碳糖，在热浓硫酸的作用下，脱水生成糖醛类化合物，糖醛类化合物与酚类化合物（3，5—二羟基甲苯、苔黑酚）反应，缩合生成有色物质，在可见波长421nm处有最大吸收峰，在标准曲线上确定相应的糖脂浓度，以此进行生物表面活性剂的定量分析。

方法一、3，5—二羟基甲苯—硫酸法
   将培养液离心后，取0.2ml酸化上清液，用1.0ml乙醚抽提三次，合并提取液，蒸发掉乙醚，加1.0ml0.05mmol/LNaHCO3溶液溶解，加1.8ml质量分数ω=0.19%3，5—二羟基甲苯(溶解在53%SO4中)，在80℃加热30min，然后室温冷却15min于421nm处比色定量。

方法二、苔黑酚反应
将发酵液1ml+9ml苔黑酚的硫酸混合液（60%硫酸和1.6%苔黑酚按5：1混合），混合后于80℃恒温30min，然后冷却15min，于421nm测定吸光度。标准品按一定浓度梯度稀释按上述方法同样测定，制作标准曲线，从而确定糖脂的浓度。

方法三、蒽酮法
将5ml发酵液+10ml乙酸乙酯混匀，萃取，取溶剂层0.05ml到试管中；用N2流除去干扰蒽酮显色的溶剂；加入1ml蒸馏水和5ml0.2%蒽酮硫酸溶液（硫酸/水=75%）显色剂；在沸水中加热10min，冷却后在620nm下测定OD值对照标准曲线得到对应的糖脂含量。
方法四
100℃显色15 min,苯酚用量1.0 mL,硫酸用量5.0 mL,于482nm处测定.结果表明,用此方法测定鼠李糖脂

或许你应该调调流动相.

“waters High-Performance Carbohydrate糖柱”是硅胶基质吧。

有些糖在酸性条件下会发生空间结构变化，从而在硅胶基质的色谱柱分离时出现双峰。

建议你稍微调整下溶液和流动相pH值，所配标准品尽量现配现用。

糖类分析，建议楼主考虑糖的特殊性，从分子结构来讲，糖存在Alpha-，Beta-构型，会有差向异构体的产生。出现峰顶双叉，或许跟这个有关。

从楼主的描述来看，可以从如下2个方面考虑：

1. 溶解样品的溶剂对化合物稳定性、色谱分离的影响；（尽量做到标准品、供试品溶剂一致）
2. 流动相对色谱分离的影响；流动相pH值是否合适。

鼠李糖，很常见的，找Waters糖分析柱的应用资料翻翻，或许里面就有现成的方法可以供参看呢。

糖分析较困难。提问者用的应该是氨基柱，分析醛糖时会发生反应。出现的现象就是发生了非特征性相互作用。国内外只有我处较好的解决了该问题，需要色谱柱可以和我联系。