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标题:[未解决]测分子量分别为294.0和1094.597，为什么如此大的差异

  [未解决]本主题悬赏 可用分 1  
ouoje[使用道具]
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发表于 2009-11-3 14:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

测分子量分别为294.0和1094.597，为什么如此大的差异

蛋白样品经HPLC收集单峰下组分，分别利用ＡＢ公司 4000 Q TRAP 液质联用和 MALDI-TOF-TOF质谱分析，结果所测分子量分别为294.0和1094.597，为什么会有如此大的差异呢？请高手帮忙解释一下，该以哪个结果为主？
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amelican_beauty[使用道具]
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发表于 2009-11-4 11:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
做蛋白多用MALDI-TOF，而且蛋白本来也属于大分子啊，所以1094.597更可靠，294可能是蛋白的碎片
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  • miracle   2009-11-4 12:05  专家分  +3   谢谢您的热心解答！
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sseia42[使用道具]
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发表于 2009-11-4 14:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
Maldi出现的一般是单电荷质谱数据，ESI会出现带多个电荷的情况，请具体分析！有分子量为1000的蛋白吗？这么小？多肽爱差不多啊
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ouoje[使用道具]
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发表于 2009-11-4 17:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢，我的样品实际是蛋白酶解产物超滤1kD得到的小肽混合物。所以结果有点不能理解了。
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ttkl533[使用道具]
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发表于 2009-11-5 10:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 QQ

 小中大
有盐吗？没盐的话直接做质谱就得了，干嘛还要过滤呢？

PS：买几个除盐的枪头，直接用来做MALDI，效果岂不是更好？
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  • miracle   2009-11-5 15:05  专家分  +3   感谢朋友对论坛的支持！
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发表于 2009-11-5 14:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有少量的盐分的，但我的目的寡肽就是1kD的，所以我必须要超滤。这样的小分子的蛋白除盐比较困难，我用过C18的小柱效果也很不理想。除盐的同时蛋白损失比较大。
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发表于 2009-11-6 10:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
蛋白含盐这是个通病，似乎没什么好办法。你可以试试NanoESI，如果含盐量不高的话，还不至于堵。如果你是在质谱实验室的，可以读读这篇论文，参考着做做。要是你的实验室只做测试的话，恐怕从质谱上考虑没什么好办法。你只能考虑各种除盐的办法了。

Chang, D.-Y.; Lee, C.-C.; Shiea, J. Detecting Large Biomolecules from High-Salt Solutions by Fused-Droplet Electrospray Ionization Mass Spectrometry. Anal. Chem. 2002, 74, 2465-2469.
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  • miracle   2009-11-6 17:37  专家分  +3   欢迎参与技术讨论！
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ouoje[使用道具]
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发表于 2009-11-6 17:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不好意思，似乎有点跑题。除盐不是主要的，我的寡肽蛋白样品经HPLC收集单峰下组分，分别利用ＡＢ公司 4000 Q TRAP 液质联用和 MALDI-TOF-TOF质谱分析，结果所测分子量分别为294.0和1094.597，为什么会有如此大的差异呢？
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unknow[使用道具]
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发表于 2009-11-9 19:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #8 ouoje 的帖子

既然知道分子量应该是1000左右，那就该查查4000 Q TRAP 液质联用是不是出问题了，可以进标准样品看一下。
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gosome[使用道具]
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发表于 2009-11-10 09:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
会不会是做Qtrap用的ESI源，戴上了多电荷啊？而且会有加氢加纳的加合峰

导致出来的分子量与TOF-TOF不成整数倍关系
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