向各位学习，小女子初学逆流。我初步尝试用氯仿：甲醇：0.2mol/L的HCl=9：10：8上了逆流，但是得到只得到一个大峰。我要分的生物碱极性相近，一个峰出来了。请问我该如何调整溶剂体系？谢谢指教。

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[ 本帖最后由 huoche 于 2009-11-5 23:29 编辑 ]

0.2MHCL酸度太大了，同时会与有机碱反应生成盐，物质都改变了

氯仿：甲醇：0.2mol/L的HCl=9：10：8 这个初始条件是如何确定的呢？

HSCCC分离天然产物成分，个人这么认为，上HSCCC之前，最好用硅胶柱粗分一下。将极性接近的作为一组，然后采用HSCCC细分。

HSCCC方法的建立：
1. 首先采用TLC，摸索分离条件，使Rf值在0.2-0.5之间。将此展开剂微调，作为HSCCC洗脱流动相、固定相（上相、下相）。
2. 氯仿-甲醇体系分离生物碱类成分还是很有效的。由于甲醇极性大，所以其比例多少合适，得先需TLC摸索确定。调整流动相的pH值，一般不用HCl，而是用HCOOH or CH3COOH，用量很少的（千分之几-百分之几，体积比，可以类同TLC中的用量）。如2楼所言，0.2mol/L的HCl，这个用量太大了，都成生物碱盐酸盐了，很难分离的。

个人建议，先硅胶柱粗分，然后TLC摸索分离条件，最后才上HSCCC。洗脱条件可以在TLC展开剂的基础上优化确定。

出的峰多少时间？

上PP看看

氯仿、盐酸，我还没见过用这个作为流动相。。。

逆流色谱可能大家做的少

对不起，最近很少上，谢谢大家的指点。

谢谢，我会按您的建议试试看。以后还请多指教