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标题:【讨论帖】Western blot一抗的选择:单抗or多抗?

purrr[使用道具]
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【讨论帖】Western blot一抗的选择:单抗or多抗?


相关疾病:
乙型肝炎
好的抗体对做好Western blot非常重要,但新手在刚接触Western blot时,会面临一抗选择的困惑:单抗还是多抗?这个问题,不同的人又有不同的回答,究竟选择的依据是怎样的?欢迎大家按格式跟帖讨论,我们会评选出10名回答出色的幸运网友,送上10个丁当。

跟帖格式:
示例:从实验室经费是否充裕这个角度出发,经费宽裕选单抗,资金不宽裕就选多抗。(仅供参考格式)

提供部分站友的回答,抛砖引玉:

@frankcai ,认为:一般来说单抗的特异性好,杂带少;多抗通常便宜点,而且比较容易砸出来,因为很多时候要考虑到蛋白的剪切。我的建议是选大公司,口碑好的品牌,注意查阅说明书,对比自己的实验体系。
链接:cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/topic/14599694?keywords=western%20blot%20%E5%A4%9A%E6%8A%97')

@boom ,认为:检测的是蛋白的磷酸化,应该用单抗。
链接:cuturl('http://immunotech.dxy.cn/bbs/topic/9381648?keywords=western%20blot%20%E5%A4%9A%E6%8A%97')

@关灯 ,认为:单抗当然最好,好象价格比较贵的说,其实现在很多人也都用多抗。我做过多抗,效果也还可以。你考虑下价格吧,如果有钱就买单抗。
链接:cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/topic/9381594?keywords=western%20blot%20%E5%A4%9A%E6%8A%97')

@johnsonchau ,认为:首选CST,效价高,特异性也可以,价格适中;abcam最全,价格较高;santa的性价比比较高,种类齐全;millipore旗下的chemicon和upstate也非常好。我觉得多克隆抗体更常见更实用。
链接:cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/topic/14721019?keywords=western%20blot%20%E5%A4%9A%E6%8A%97')

@yihui88117 ,认为:一般是单抗好于多抗!很多公司都有抗体买!国外的抗体要比国内的抗体好一点!但是象乙肝E抗体我觉的没有必要买国外的,因为太贵了!
链接:cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/topic/1626604?keywords=western%20blot%20%E5%A4%9A%E6%8A%97')
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一般来说多找出一些文献参考看看别人用什么,都有介绍的,看看图片效果怎么样,有单抗尽量用单抗。
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hulu呼噜[使用道具]
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现在单抗和多抗技术都非常成熟,所以很多公司的单抗和多抗价格差异不大,最好还是好根据应用和文献选择抗体吧o(∩_∩)o
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hulu呼噜[使用道具]
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我觉得打抗体用的抗原肽的选择更重要,好的多抗特别是用预吸附/抗原亲和纯化过的不比某些单抗差
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utt0989[使用道具]
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俺一般能选单抗就不选多抗
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am10[使用道具]
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我觉得打抗体用的抗原肽的选择更重要,好的多抗特别是用预吸附/抗原亲和纯化过的不比某些单抗差

==============================================================================================================

1)顶楼上,多肽(14aa左右)作为抗原的多抗经过亲和纯化之后,抗体纯度非常高。特异性比较好。
2)单纯讨论单抗好还是多抗好几乎意义不大。个人觉得混合型单抗是最好的,具备多抗的高亲和力和有限表位的特异性。
3)经过严格验证的(各种对照,抗原封闭/吸收,内源性检测等等),能够做出好data的抗体就是好抗体。
4)WB的杂带原因很多,见过很多多抗无任何杂带,也见过很多单抗很多杂带。单一表位也可能和其他蛋白有一定的同源性,这样单抗出杂带的情况就发生了。如果其他应用要视情况而定。
5)总之论特异性 单抗大于多肽做抗原的多抗(亲和纯化)大于全蛋白的多抗(亲和纯化)大于protein A/G纯化的多抗。
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最好根据实验指标选取,尽量取单抗,杂质少,更准确些
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貌似现在单抗和多抗的价格也差不了多少,从特异性角度靠考虑,还是选取单抗好
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sunnyB[使用道具]
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我的一抗选择原则:
1. 先查一下该抗体的相关专业外文文献,先看看前人一般选择哪家公司的哪种抗体较多,且一定要根据期刊质量和图片结果好坏综合判断,提供参考;
2. 若未找到相关文献或查到的文献信息不详等原因,也可以通过公司查找,如Santa Cruz、CST、abcam、chemicon、upstate、millipore等知名品牌公司。其中磷酸化抗体优先考虑CST公司;
3. 种属反应性的选择(species reactivity):对应抗体适合检测哪种种属动物体内的抗原,如Mouse、Rat、Human等。
4. 应用范围的选择:是用于Western blotting,或免疫组化IHC、免疫荧光IF、免疫沉淀IP等;甚至表明石蜡切片IHC-P或冰冻切片。
5. 单克隆和多克隆抗体的选择:由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合,就像导弹精确地命中目标一样。另一方面,即使是同一个抗原决定簇,在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体,形成好几种单克隆抗体混杂物,称为多克隆抗体。在抗原抗体反应中,一般单克隆抗体特异性强,但亲和力相对小,检测抗原灵敏度相对就低;而多克隆抗体特异性稍弱,但抗体的亲和力强,灵敏度高,但易出现杂带。我习惯选择多克隆抗体,因为考虑其它几个问题后。
6. 种属来源:Mouse、Rat、Human、Goat等,这与你实验室有哪种对应的二抗多来选择即可。
7. 生产厂家的选择:如santa Cruz公司一抗一般1 ml (浓度为200 ug/ml),价格1900-2100元,性价比较高,但相比其它著名公司,抗体投诉率较高;而CST、Abcam、chemicon等公司一抗一般100 ul (浓度为1 mg/ml),价格2000-4000元。
8.选择国产、国外原装、国外进口分装?我们组只要actin内参购买博士德或博奥森等公司;若一抗是课题组多位学生甚至长期持续做的话,建议购买国外原装;若仅仅某届同学做一次,建议进口分装,如中杉金桥。

欢迎大家交流,不妥之处请指正。
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bamboo16[使用道具]
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楼主所言极是。
关于国外大公司的情况我谈谈我了解的情况。
1,abcam abcam全球300家供应商,百分之60是国内生产的,包括武汉博士德都是abcam的供应商,而且早在07年就开始,诸如ab6xxxx的货号,只不过蛋白浓度不一样,博士德卖给abcam的是浓缩后的抗体,其他有北京奥维亚,宜康,百奇,傲锐东源等等。abcam的成功在于在电商兴起的年代,他将用户对抗体的使用体验也公布出来(abreview?),对于那些用的不好的抗体,abcam马上下架。
2,santa 种类比abcam还多,比较了解的一个情况就是国内某公司生产的1mg/ml的磷酸化抗体(这些抗体abcam也在卖)在santa那边变成了0.1mg/ml。
3.其他的国外大公司 Nouvs≈于genetex≈sigma(prestige系列号称很牛)≈lifespan(IHC plus系列是特色,实际上都是验证其他公司抗体)≈abnova 因为这些公司都是来自差不多的供应商或者相互贴牌,产品都一样的来源。价格也差的不多。
4.CST 由于自己控制抗体质量,所以很稳定。也正是因为这个原因和abcam差不多同时期成立,abcam的种类是CST的20多倍,销售额也是数十倍。
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