【求助】western 曝光求助

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标题:【求助】western 曝光求助

wawa[使用道具]
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发表于 2013-4-11 14:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

做了好久的western,用ECL化学发光，膜上的条带荧光肉眼能看到，暗匣曝光总是曝不出来（仪器成像可以出来），暗匣，胶片，定影显影液都是新的，感觉是这三样的问题。（暗匣:奥华x-射线摄影暗匣，胶片：柯达x-OMAT BT 医用X射线胶片，定影显影粉：乐凯，按说明配制）

求助啊，这三样大家都用的什么牌子的？

帮帮我吧，以前没做过暗匣曝光

yychen[使用道具]
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发表于 2013-4-11 14:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你的一抗和二抗结合情况，还有就是你的二抗与ECL结合情况。你找找这两个地方原因

DNA[使用道具]
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发表于 2013-4-11 14:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你说的暴不出来是指X光片是全白底还是全黑片？如果你配置的试剂没有问题，但是肉眼可以看见条带，那肯定可以压出片子来，只是时间不能长，一长就全黑了，肉眼能够看见的情况一般只要曝光1-10秒就可以了。如果是试剂的问题，那就更换试剂试试吧。

avi317[使用道具]
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发表于 2013-4-11 14:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

试试这种Western blot 多用途液，很好用的。可以帮你节省很多的宝贵时间。
cuturl('http://item.taobao.com/item.htm?spm=2013.1.0.106.XrMJhT&scm=1007.77.0.0&id=19395523424&pvid=8d8bb283-9e8d-41d4-b956-0316cfce5afd&ad_id=&am_id=&cm_id=&pm_id=')

memory[使用道具]
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发表于 2013-4-11 14:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

剪胶片确保绝对黑暗了吗别让胶片见光啊

nn255[使用道具]
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发表于 2013-4-11 14:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

仪器成像既然能出，证明曝光之前的试剂，操作都没有问题。你只需要考虑：
1、你自己的胶片，是否有其他人用过曝光了，而你不知道，因为你曝光的时候是在暗室，曝光了的胶片是无法用的了。当然这个在你爆完光出来可以看出来，应该能排除这一可能性。
2、你自己配置的定影、显影液有问题，我记得定影液还是显影液好像是有一大包，一个小包（好久之前用的现在基本买现成的A\B液，记得不太清楚），是不是配置的时候忘记加小包的了。
3、曝光之后，胶片过显影，水，定影的顺序弄错了

wawa[使用道具]
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发表于 2013-4-11 14:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

之前没做过暗匣曝光，想就你说的问一下
1.如果胶片被曝光了，再我曝过后胶片会是什么样的（如何排除）
2.你用的现成的A\B液（定影显影）是什么牌子的

我也想换试剂但不知什么牌子好？

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发表于 2013-4-11 14:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼上的说的对，机器可以曝光，前面的试剂和操作肯定没问题了。可能的原因：1.胶片，而且可能性很大，如果曝光了的胶片，即时显影过，也会发白，奶白色那种，不透亮；还有我不知道你的胶片的情况，最好配张图吧。 2. 显影和定影液的问题 3.我现在用的是2种胶片，一种很敏感但是便宜，另一种不敏感但是爆出来比较干净但是曝光时间要久一点，即时你看得见条带，由于胶片感光性的差别，也有可能造成没东西的结果，

qqq111[使用道具]
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发表于 2013-4-11 14:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也是肉眼可见的亮光条带，可是曝光就掌握不好，我用的是柯达的显影液定影液，新换的显影液吧，进去一下就黑了，要么黑完了，要么部分黑了，actin的条带好细啊，觉得肯定有问题

tuomu45[使用道具]
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发表于 2013-4-11 14:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

肉眼可见基本压两秒就爆很明显了柯达的显定影液应该没问题怀疑是胶片见光了是不是暗房不够暗啊有时候红灯太亮也不行

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